核黄素光化学法对红细胞的影响以及对淋巴细胞灭活效果的研究

发布时间：2017-12-29 02:18

本文关键词：核黄素光化学法对红细胞的影响以及对淋巴细胞灭活效果的研究　出处：《华东师范大学》2015年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：背景输血是近代医学救死扶伤的重要手段,另一方面,输血亦可能存在导致受血者遭遇经血传播病原体感染的风险。目前,防止输血传播疾病的主要方法是血液病原体筛查,但现有检测技术由于病原体基因变异、免疫原性的改变以及感染的“窗口期”,小概率的漏检事件在所难免,更何况血液检测涵盖范围十分有限,除艾滋病病毒(HIV)、乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)及梅毒螺旋体外,至少有包括人类T细胞白血病病毒(HTLV)、巨细胞病毒(MCV)、EB病毒(EBV)及T淋巴细胞等数十种可经血传播的病原体未列入检测范围,因此,仅依靠血液筛检,不可能完全杜绝输血传播疾病的风险,而血液及血液成分病原体灭活技术被认为是从根本上彻底杜绝输血相关病原体通过输血途径传递,保证输血安全的最可靠屏障,血液病原体灭活方法及其机理的研究也因此成为输血医学研究的热点。血液病原体灭活技术主要有亚甲蓝光化学法、补骨脂素S-59法、核黄素光化学法、S-303病原体灭活技术、PEN-110病原体灭活技术等。其中用于血浆的病原体灭活技术主要以亚甲蓝光化学法为主,血小板的病原体灭活技术多采用补骨脂素S-59法和核黄素光化学法。目前,尚未有适用于全血的病原体灭活技术。异体淋巴细胞可在免疫功能低下的受血者体内大量增殖,最终将受血者机体作为异物排斥,形成输血相关移植物抗宿主病(TA-GVHD),该病死亡率可达90%以上,故异体淋巴细胞在输血医学上被视为是一种特殊的病原体。现知核黄素光化学法能够有效灭活淋巴细胞,但在灭活淋巴细胞的同时会否对红细胞造成不良影响,尚缺乏深入的研究。本研究旨在探讨可见光激发的核黄素光化学方法,对淋巴细胞的灭活效果及对红细胞的影响,为最终建立核黄素光化学红细胞乃至全血病原体灭活技术进行方法学实践和数据积累。目的研究420nm可见光下核黄素光化学法对红细胞变形能力、膜结构、形态、代谢能力、活力、功能等的影响；对淋巴细胞细胞形态和活性、增殖、凋亡状况和细胞因子分泌能力等的影响。方法1)将全血分为两组：实验组和对照组。实验组加入核黄素(终浓度：100μmol/L),置于4℃病原体灭活箱中,420rnm可见光下进行双侧照射,照射剂量为40J/mL,对照组不加核黄素,不光照。2)用血气分析仪检测0d、7d、21d、35d、42d时全血中红细胞的钾离子水平、血红蛋白氧饱和度、葡萄糖含量(Glucose content,Glu)、乳酸含量(Lactic acid content,Lac)等。3)分离全血中的红细胞,以一定比例重悬于红细胞保存液中,于保存0d、7d、21d、35d、42d时检测红细胞渗透脆性、游离血红蛋白含量、溶血率、红细胞数量(Red blood cell count,RBC)、红细胞压积(Hematocrit, Hct)、血红蛋白含量(Hemoglobin content,Hgb)、ATP含量、2,3-DPG含量。4)分离淋巴细胞,计数,体外培养,CD3/CD28抗体刺激增殖,培养3d检测淋巴细胞的细胞形态、活性、增殖能力、凋亡状况以及细胞因子分泌状况。研究CD3/CD28抗体刺激前后,核黄素光化学法处理对淋巴细胞的灭活效果。结果 1、可见光下核黄素光化学法对红细胞形态如红细胞数量、血红蛋白含量、红细胞压积没有影响；对红细胞代谢如葡萄糖含量、乳酸含量没有影响；对红细胞活力指标ATP含量没有影响；对红细胞功能指标如血红蛋白氧饱和度、2,3-DPG含量没有影响；对红细胞变形能力如渗透脆性没有显著影响,对红细胞膜结构的检测指标如细胞外游离血红蛋白含量和K+浓度有一定影响,但溶血率仍然满足欧美和我国标准。2、核黄素光化学法使淋巴细胞形态改变、活性减弱、增殖能力减弱、凋亡增强、细胞因子分泌减少。结论核黄素光化学法对红细胞变形能力、膜结构、形态、代谢能力、活力、功能等的影响在可接受范围内,灭活淋巴细胞效果良好。
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【学位授予单位】：华东师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R457.1

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