金黄色葡萄球菌新型肠毒素I双抗夹心-酶联免疫检测方法的建立

发布时间：2017-12-30 15:10

  本文关键词：金黄色葡萄球菌新型肠毒素I双抗夹心-酶联免疫检测方法的建立　出处：《食品科学》2016年16期 　论文类型：期刊论文

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【摘要】：目的:建立简便、灵敏检测金黄色葡萄球菌肠毒素I(staphylococcal enterotoxin I,SEI)的双抗夹心酶联免疫吸附方法(double-antibody sandwich-enzyme linked immunosorbent assay,DAS-ELISA)。方法:利用DAS-ELISA检测程序确定单克隆抗体、抗血清、辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记的羊抗兔Ig G(Ig G/HRP)的最佳稀释度,再通过检测不同包被缓冲液、封闭时间、抗原包被时间、Ig G/HRP作用时间以及四甲基联苯胺(3,3’,5,5’-tetramethylbenzidine,TMB)显色时间条件下的OD450 nm值对实验条件进行优化,最后用灵敏度、批内变异、批间变异和加标回收率指标对方法进行评价。结果:抗SEI单克隆抗体的最佳稀释质量浓度为2.89 mg/L,抗SEI兔血清稀释度1∶2 000,酶标二抗稀释度1∶6 000;1×磷酸缓冲盐溶液(p H 7.4)为最佳包被缓冲液;最佳封闭时间、抗原孵育时间、酶标二抗孵育时间和TMB显色时间分别为60、90、30 min和15 min。该方法的回归方程为y=0.040 9x+0.042 9,R2=0.993 3;灵敏度为0.5μg/L,精密度批内变异低于10%,批间变异低于15%,除巴氏杀菌牛乳外,对生理盐水、熟牦牛肉糜、大米饭和超高温瞬时灭菌牛乳回收率达90%以上。结论:本研究建立了一种快速检测SEI的双抗夹心方法。
[Abstract]:......
【作者单位】： 西南民族大学生命科学与技术学院;
【基金】：国家自然科学基金面上项目(31371781) 四川省应用基础项目(2014JY0253) 教育部回国留学启动项目 西南民族大学研究生创新项目(CX2015SZ096)
【分类号】：R446.6
【正文快照】： 金黄色葡萄球菌肠毒素(staphylococcal enterotoxins,SEs)主要是由血浆凝固酶和耐热核酸酶阳性的葡萄球菌分泌的胞外毒素,其会导致中毒休克、食物中毒等疾病[1-4]。目前已发现的肠毒素有23种血清型,其中SEA~SEE称为传统肠毒素,SEG~SEl X为新型肠毒素[1,5-6]。人类对于各型SEs

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本文编号：1355501