人ASPP2重组腺病毒质量控制研究

发布时间：2018-01-06 13:21

  本文关键词：人ASPP2重组腺病毒质量控制研究　出处：《中国药理学通报》2016年06期 　论文类型：期刊论文

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【摘要】：目的对人ASPP2重组腺病毒制剂进行质量分析,并针对其关键质量特性建立质控方法。方法采用PCR法对重组腺病毒的载体结构特征基因E2B和目的基因ASPP2进行扩增,琼脂糖电泳进行分子量鉴定;采用UV-SDS法测定重组腺病毒的病毒颗粒数;采用组织培养半数感染剂量法(TCID50)测定重组腺病毒的感染滴度;采用Western blot法对重组腺病毒感染靶细胞后目的蛋白ASPP2的表达情况进行检测;通过MTT实验观察重组腺病毒对肝癌细胞的生物学效应;采用A549细胞进行重组腺病毒的复制型病毒检测。结果腺病毒载体E2B基因和目的基因ASPP2的鉴定结果与理论值相符;重组腺病毒的病毒颗粒数为每毫升5.6×10~(12)VP,病毒滴度为每毫升2×10~(11)IU,比活性为3.5%;病毒感染靶细胞24 h后可检测出ASPP2蛋白的表达;重组腺病毒对肝癌细胞具有生长抑制作用;复制型腺病毒(RCA)水平小于1 RCA/3.0×10~(10)VP,符合中国食品药品监督管理局(SFDA)的标准。结论建立了人ASPP2重组腺病毒的关键特征的质量控制方法,为该重组腺病毒质量标准的建立及相关应用奠定了基础。
[Abstract]:Objective To analyze the quality of recombinant adenovirus vector and establish a quality control method for the key quality characteristics of recombinant adenovirus . The expression of recombinant adenovirus was determined by PCR method . The expression of recombinant adenovirus was determined by MTT assay . The recombinant adenovirus was used to measure the expression of recombinant adenovirus . The recombinant adenovirus had a growth inhibition effect on hepatocellular carcinoma cells . The recombinant adenovirus was less than 1 RCA / 3.0 脳 10 ~ ( 10 ) VP , which was consistent with the standard of China Food and Drug Administration ( SFDA ) . Conclusion The quality control method of recombinant adenovirus was established .

【作者单位】： 首都医科大学附属北京佑安医院北京市肝病研究所;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(No 81272266);国家自然科学基金国际(地区)合作与交流项目(No 81361120401) 北京市卫生系统高层次卫生技术人才培养项目资助(No 2015-3-101) 北京市肝病研究所自主课题基金(No BJIH-01604)
【分类号】：R450
【正文快照】： 基因治疗是指运用DNA转移来治疗甚至预防人类疾患。将DNA送入细胞的方法虽然很多,但进行基因治疗时,必须让多数的细胞都获得DNA,一般的DNA传送方法都无法达到此目标。由于病毒感染细胞的效率很高,因此适合做基因治疗的载体,将预转导的基因送入细胞内。腺病毒载体是现在基因治

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本文编号：1388043