储存血液制品中的微粒在输血相关急性肺损伤中的作用研究

发布时间：2018-02-21 11:35

  本文关键词： 血小板微粒 sCD40L 红细胞微粒 中性粒细胞呼吸爆发 急性肺损伤　出处：《华东师范大学》2015年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的：研究血液制品储存过程中产生的血小板微粒(PMPs)和红细胞微粒(RMPs)对引发中性粒细胞(PMNs)产生呼吸爆发的作用,并利用输血相关急性肺损伤(TRALI)的“两次打击”模型从体外细胞水平评价PMPs对人肺微血管内皮细胞(HMVECs)的损伤和体内小鼠水平评价两种微粒对诱导小鼠急性肺损伤的作用。方法：从储存单采血小板(A-PLT)1中分离纯化的PMPs、储存浓缩红细胞上清中分离纯化的RMPs和重组SCD40L分别与PMNs相互作用,通过检测PMNs活性氧(ROS)的生成量,分析储存PMPs和RMPs及重组sCD40L对引发fMLP活化的PMNs呼吸爆发的作用；流式检测HMVECs表面的粘附分子-1 (CD54; ICAM-1)和PMNs表面的整合素αM(CDllb)的表达情况判断细胞的活化程度。用LPS预处理HMVECs并建立PMNs介导的HMVECs损伤的两次打击体外模型,从细胞水平评价储存PMPs、重组sCD40L和NADPH氧化酶的抑制剂Apocynin对HMVECs的损伤作用；通过检测LPS致敏的小鼠输注纯化的PMPs和RMPs后血管外肺水量、肺泡灌洗液蛋白渗漏、肺组织结构、肺炎症程度及PMN滞留情况从小鼠体内水平评价PMPs和RMPs对引发小鼠急性肺损伤的作用。结果：PMPs能够剂量依赖性的诱导PMNs表面CDllb表达升高,其携带的sCD40L与PMNs表面的CD40相互作用,能够显著引发fMLP活化的PMNs产生呼吸爆发,从而诱导PMNs介导的HMVECs发生损伤；抑制PMNs的NADPH氧化酶作用,可以有效抑制PMPs引发的PMNs呼吸爆发和PMNs介导的HMVECs损伤。LPS可以剂量依赖性的诱导HMVECs表面CD54的表达升高,封阻HMVECs表面表达的CD54可以降低PMPs诱导的PMNs介导的HMVECs损伤。体内实验显示PMPs能够剂量依赖性的引起LPS致敏的小鼠发生急性肺损伤,过滤除去PMPs后可以部分抑制血浆引发LPS致敏的小鼠发生急性肺损伤。浓缩红细胞在正常条件储存过程中,RMPs会发生积累。RMPs能够剂量依赖性的引发fMLP活化的PMNs呼吸爆发和诱导LPS致敏的小鼠发生急性肺损伤；滤除RMPs后可以显著抑制红细胞上清引发fMLP活化的PMNs呼吸爆发,并部分抑制上清诱导LPS致敏的小鼠发生急性肺损伤。结论：储存血小板中的PMPs携带的CD40L信号,可以引起PMNs介导的HMVECs损伤,并且能诱导LPS致敏的小鼠发生急性肺损伤；浓缩红细胞储存过程中,RMPs会发生积累并能引发PMNs呼吸爆发,诱导小鼠发生急性肺损伤。储存血液成分中积累的微粒可能在诱导输血后急性肺损伤(TRALI)中发挥重要作用。
[Abstract]:Objective: to study the effects of platelet microparticles (PMPs) and erythrocyte microparticles (RMPs) produced during the storage of blood products on the initiation of respiratory burst in neutrophils (PMNs). The "two strikes" model of transfusion-associated acute lung injury (TRALI) was used to evaluate the injury of PMPs to human pulmonary microvascular endothelial cells (HMVECs) in vitro and mice in vivo to evaluate the effects of two kinds of particles on inducing acute lung injury in mice. Methods: the purified PMPs were isolated from the single platelets collected from the platelets and the purified RMPs and recombinant SCD40L were isolated from the supernatants of concentrated erythrocytes and interacted with PMNs, respectively. The effects of storage of PMPs and RMPs and recombinant sCD40L on the initiation of PMNs respiratory burst activated by fMLP were analyzed by detecting the amount of PMNs reactive oxygen species (Ros). The expression of adhesion molecule 1 (CD54; ICAM-1) on the surface of HMVECs and integrin 伪 MmmCDllb on the surface of PMNs were detected by flow cytometry. The HMVECs was pretreated with LPS and the in vitro model of HMVECs damage mediated by PMNs was established. To evaluate the damage effect of Apocynin, an inhibitor of recombinant sCD40L and NADPH oxidase, on HMVECs at the cell level, the extravascular lung water, the protein leakage of alveolar lavage fluid, and the lung tissue structure were detected by injecting purified PMPs and RMPs into LPS sensitized mice. The effect of PMPs and RMPs on inducing acute lung injury in mice was evaluated by the degree of lung inflammation and the retention of PMN in vivo. Results the CDllb expression on PMNs surface was increased in a dose-dependent manner, and the sCD40L carried by it interacted with CD40 on PMNs surface. It can induce respiratory burst of PMNs activated by fMLP, induce HMVECs damage mediated by PMNs, inhibit NADPH oxidase of PMNs. LPs can effectively inhibit PMNs respiratory burst induced by PMPs and HMVECs damage mediated by PMNs. LPs can induce the increase of CD54 expression on HMVECs surface in a dose-dependent manner. Blocking the expression of CD54 on the surface of HMVECs could reduce the PMNs induced HMVECs damage induced by PMPs. In vivo, PMPs could induce acute lung injury in LPS sensitized mice in a dose-dependent manner. Filtration after removing PMPs could partially inhibit the occurrence of acute lung injury in mice sensitized to LPS by plasma. RMPs accumulated in concentrated red blood cells during storage under normal conditions. RMPs could induce PMNs respiratory explosion activated by fMLP in a dose-dependent manner. Acute lung injury occurred in LPS sensitized mice. Filtration of RMPs could significantly inhibit the respiratory burst of fMLP activated PMNs induced by erythrocyte supernatant, and partly inhibit the occurrence of acute lung injury in LPS sensitized mice induced by supernatant. Conclusion: the CD40L signal carried by PMPs in storage platelets can be stored. It can induce HMVECs damage mediated by PMNs and induce acute lung injury in mice sensitized with LPS. The accumulation of particles in the stored blood components may play an important role in inducing acute lung injury after blood transfusion in mice.
【学位授予单位】：华东师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R457.1

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本文编号：1521873