氯胺酮滥用人群尿液中氯胺酮、去甲氯胺酮消除规律及驾驶相关心理研究

发布时间：2018-02-23 20:15

本文关键词： 超快速液相色谱-串联质谱尿液氯胺酮去甲氯胺酮消除规律驾驶相关心理　出处：《南方医科大学》2015年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的：(1)采用超高效液相色谱-串联质谱(UFLC-MS/MS)法测定人尿液中氯胺酮及其代谢产物去甲氯胺酮的浓度建立简单快速、科学有效、特异性好、准确度高、稳定性好的UFLC-MS/MS法同时测定人尿液中氯胺酮及其代谢产物去甲氯胺酮的浓度,建立氯胺酮滥用人群戒断过程中尿液氯胺酮、去甲氯胺酮的平均浓度-时间曲线模型,求出曲线模型方程并研究其在体内的消除规律。(2)采用PsyTech心理实验系统研究氯胺酮滥用对驾驶相关心理的影响建立完善的心理实验以测试氯胺酮滥用人群和非药物滥用人群反应时、速度知觉和注意集中性等驾驶相关心理,以研究吸食氯胺酮后对驾驶相关心理的影响；结合氯胺酮滥用人群戒断过程中尿液氯胺酮、去甲氯胺酮的浓度变化特点,以研究氯胺酮、去甲氯胺酮浓度变化对驾驶相关心理的影响。方法：(1)测定人尿液中氯胺酮及其代谢产物去甲氯胺酮浓度：①尿液样品处理方法：向1mL待测尿液中分别加入100μl氯胺酮内标工作液(100.0ng/mL KET-D4溶液),2mL0.01mol/L硼酸钠缓冲液,3mL乙酸乙酯,涡旋30s混匀,离心15min (5000rpm),取上清置于试管中,氮气吹干,100μl流动相(乙腈：0.1%甲酸+20mmol/L乙酸铵水溶液=75：25(v/v))溶解残留物,涡旋30s混匀,取5μl进样分析。②质谱分析：氯胺酮、去甲氯胺酮和KET-D4在正离子检测方式下,采用ESI源,主要生成[M+H]+准分子离子,分别为m/z238.20、m/z224.25和m/z242.30。选择性对准分子离子[M+H]+进行产物离子扫描,获得氯胺酮的主要碎片为m/z125.25和m/z207.25,去甲氯胺酮的主要碎片为m/z125.25和179.30,用于定性分析；其中m/z207.25和m/z179.30,响应较强,作为多反应监测(MRM)的定量离子,用于定量分析。KET-Dd的主要碎片离子为m/z129.25,将m/z129.25作为定量分析时的监测离子。③色谱条件：预柱：RRLC在线过滤器(Agilent,Germany)；色谱柱：Shim-pack FC-ODS超快速色谱柱(150mm×2mm I.D.3um):流动相：乙腈：0.1%甲酸+20mmol/L乙酸铵水溶液=75：25(v/v)；流速：0.3mL/min:柱温：40℃；进样量：5μl。④实验对象的选择及样品采集：本课题的实验对象为广州某自愿戒毒机构的22名氯胺酮滥用个体,入院时签署知情同意书并填写《氯胺酮自评量表》。患者从入院起至出院,每日清晨九时由其管床护士负责收集其尿中段尿液10mL于50mL离心管中,严格控制尿液采集时间,尿液采集后置于-20℃冰箱保存。⑤尿液样品分析：未知尿液样品的测定按“尿液样品处理方法”项下操作,每天建立一条标准曲线,同时分析质控样品,并以同批的标准曲线计算各时点样品中氯胺酮、去甲氯胺酮和质控样品的浓度,由质控样品的结果决定当日数据的取舍,质控样品的相对偏差应在±15%范围内。⑥数据处理：将采集同一住院天数、不同氯胺酮滥用个体的尿液样本浓度数据的平均值与住院天数列表并作图,通过SPSSl7.0统计分析软件分别对其尿液中的氯胺酮、去甲氯胺酮平均浓度与时点进行曲线拟合,并建立尿液中氯胺酮、去甲氯胺酮的平均浓度-时间曲线模型,求出曲线模型方程。(2)氯胺酮滥用对驾驶相关心理的影响：①实验对象选择及心理测试：以氯胺酮滥用人群作实验组,非药物滥用人群作对照组；对实验组对象从入院起至出院每日清晨十时的反应时、速度知觉和注意集中性等驾驶相关心理进行测试并收集数据,于同一时段采集并收集对照组对象的相关数据信息。②实验内容：包括对实验组和对照组的反应时、速度知觉和注意集中性等心理指标进行测试以及数据收集。其中反应时包括：简单反应时(视觉简单反应时和听觉简单反应时)、选择反应时(视觉选择反应时和听觉选择反应时)、视觉反应时(脚)和听觉反应时(脚)等。③心理测试方法：通过PsyTech-EP2009型心理实验平台进行本次实验。对实验员进行PsyTech-EP2009型心理实验平台操作培训,并采用面对面的形式对实验组和对照组对象进行相关心理指标测试。④简单反应时测试：视觉简单反应时：以“红色”实心圆作为实验材料,实验对象使用2号反应盒,红色按键为反应键,当电脑屏幕上出现红色圆时,立即做出反应按下反应键,每10次为一组,测试两组。听觉简单反应时：以“750Hz(中音)”纯音作为实验材料,实验对象使用1号反应盒,红色按键为反应键,当听到声音时,立即做出反应按下反应键,每10次为一组,测试两组。⑤选择反应时测试：视觉选择反应时：以红、黄、绿和蓝色四种颜色实心圆作为实验材料,实验时随机呈现,实验对象使用2号反应盒,根据屏幕呈现的不同颜色,按相对应的颜色键,重复测试20次。听觉选择反应时：以三种不同频率的纯音(高音：2000Hz、中音：750Hz和低音：350Hz)作为实验材料,实验时随机呈现,实验对象使用1号反应盒,根据听到的声音高低,按相应的反应键,重复测试30次。其中高音按“+”号键、低音按“一”号键、中音按“=”号键。⑥视觉反应时(脚)测试：视觉反应时(脚)测试通过实验光反应(脚)完成。以“红色”实心圆作为实验材料,实验对象使用脚踏板,在红色圆出现时尽快踩脚踏板,重复测试10次。⑦听觉选择反应时(脚)测试：听觉反应时(脚)测试通过实验声反应(脚)完成。以“750Hz(中音)”纯音作为实验材料,实验对象使用脚踏板,在听到声音时尽快踩脚踏板,重复测试10次。⑧速度知觉测试：速度知觉测试通常以绝对误差|x-s|来表示。实验对象估计以2单位/秒速度运动(s=3906ms)的红色亮点到达终点的时间,按1号反应盒上的任意键作出反应后,看到其判断的误差距离,可在下一次操作中调整自己的估计时间,重复测试20次。⑨注意集中性测试：注意集中性测试,通过划消实验完成,通常以工作效率(E)来表示。本实验记录实验对象两分钟内检查由字母构成的工作表中字母总数、划消字母“B”的数目、错划字母“B”的数目和漏划字母“B”的数目。⑩分析方法：对实验组、对照组整体比较采用两因素重复测量方差分析；实验组、对照组组间比较采用单因素方差分析；实验组、对照组组内比较采用单因素重复测量方差分析和配对t检验；将同一住院天数、不同氯胺酮滥用个体的尿液样本浓度数据的平均值分别与各项心理指标作图,然后通过SPSS17.0统计分析软件分别对其尿液中的氯胺酮、去甲氯胺酮平均浓度与各项心理指标进行曲线拟合,并建立尿液中氯胺酮、去甲氯胺酮的浓度-心理指标曲线模型,求出曲线模型方程。结果：(1)测定人尿液中氯胺酮及其代谢产物去甲氯胺酮浓度：氯胺酮、去甲氯胺酮的线性范围均为0.1～1000.0ng/*mL,检出限均为0.05ng/mL,定量下限均为0.1ng/mL.10.0ng/mL和500.0ng/mL样品浓度下,氯胺酮日内精密度分别是3.715%和1.457%,日间精密度分别是4.873%和1.813%,回收率在98.071%～100.197%范围内,基质干扰在-2.425%～-0.437%之间；去甲氯胺酮日内精密度分别是4.041%和0.787%,日间精密度分别是4.749%和1.788%,回收率在98.419%～102.873%范围内,基质干扰在-3.322%～-2.276%之间。尿液中氯胺酮平均浓度-时间曲线模型方程为：y1=2331.899(x1-2.247),式中：y1为尿液中氯胺酮浓度,单位为ng/mL；x1为其戒断天数,单位为天(d)；尿液中去甲氯胺酮平均浓度-时间曲线模型方程为：y2=2812.051(x2-1938),式中：y2为尿液中去甲氯胺酮浓度,单位为ng/mL；x2为其戒断天数,单位为天(d)。氯胺酮、去甲氯胺酮浓度与时间成反比。9天后氯胺酮被完全清除,13天后去甲氯胺酮被完全清除。(2)氯胺酮滥用对驾驶相关心理的影响：实验组、对照组间的视觉简单反应时、听觉简单反应时、视觉选择反应时、听觉选择反应时、视觉反应时(脚)、听觉反应时(脚)、绝对误差和工作效率差异均有统计学意义,且除工作效率随时间的延长呈下降趋势外,其余指标均随时间的延长而上升；实验组间不同时点的各项指标差异均有统计学意义,对照组间不同时点的各项指标差异均无统计学意义；进行测试后的各时点处,实验组对照组间的各项指标差异均有统计学意义,且实验组除工作效率比对照组低外,其余指标均高于对照组。尿液中氯胺酮、去甲氯胺酮的浓度-视觉简单反应时曲线模型方程为：y1=222.505+44.303lnx1、y2=143.880+55.6961nx2,尿液中氯胺酮、去甲氯胺酮的浓度-听觉简单反应时曲线模型方程为：y3=764.548-2444.982/x3、y4=772.264-6358.084/x4,尿液中氯胺酮、去甲氯胺酮的浓度-视觉选择反应时曲线模型方程为：y5=309.482+64.910lnx5、y6=196.339+81.0071nx6,尿液中氯胺酮、去甲氯胺酮的浓度-听觉选择反应时曲线模型方程为：y7=784.455-1670.499/x7、y8=787.830-4272.416/x8,尿液中氯胺酮、去甲氯胺酮的浓度-视觉反应时(脚)曲线模型方程为：y9=347.973+17.4261nx9、ylo=317.675+21.7291nx1o,尿液中氯胺酮、去甲氯胺酮的浓度-听觉反应时(脚)曲线模型方程为：y11=320.435+32.8341nx11、y12=265.521+40.4291nx12,尿液中氯胺酮、去甲氯胺酮的浓度-绝对误差曲线模型方程为：y13：e6.117-3104/x13、y14=e6114-7.578/x14,尿液中氯胺酮、去甲氯胺酮的浓度-工作效率曲线模型方程为：y15=691.228x15-0.107、y16=819.450x16-0.129,式中：Y1-Y14,分别为氯胺酮滥用人群视觉简单反应时、听觉简单反应时、视觉选择反应时、听觉选择反应时、视觉反应时(脚)、听觉反应时(脚)、绝对误差,单位均为ms, y15、y16为氯胺酮滥用人群的工作效率；X1、X3、X5、X7、X9、X11、X13、X15为尿液中氯胺酮浓度,单位为ng/mL, X2、4、 X6、X8、X10、X12、X14、X16为尿液中去甲氯胺酮浓度,单位为ng/mL。由拟合曲线可知,视觉简单反应时恢复至正常范围时尿液中氯胺酮最高浓度为4.752ng/mL,去甲氯胺酮最高浓度为14.191ng/mL,需戒断16d视觉简单反应时才可恢复正常；听觉简单反应时恢复至正常范围时尿液中氯胺酮最高浓度为6.640ng/mL,去甲氯胺酮最高浓度为16.911 ng/mL,需戒断14d听觉简单反应时才可恢复正常；视觉选择反应时恢复至正常范围时尿液中氯胺酮最高浓度为34.444ng/mL,去甲氯胺酮最高浓度为68.905ng/mL,需戒断7d视觉选择反应时才可恢复正常；听觉选择反应时恢复至正常范围时尿液中氯胺酮最高浓度为7.908ng/mL,去甲氯胺酮最高浓度为19.907ng/mL,需戒断13d听觉选择反应时才可恢复止常；视觉反应时(脚)恢复至正常范围时尿液中氯胺酮最高浓度为5.654ng/mL,去甲氯胺酮最高浓度为16.177ng/mL,需戒断15d视觉反应时(脚)才可恢复正常；听觉反应时(脚)恢复至正常范围时尿液中氯胺酮最高浓度为10.166ng/mL,去甲氯胺酮最高浓度为25.577ng/mL时,需戒断11d听觉反应时(脚)才可恢复正常；速度知觉绝对误差恢复至正常范围时尿液中氯胺酮最高浓度为7.338ng/mL,去甲氯胺酮最高浓度为18.041ng/mL,需戒断14d速度判断的准确性才可恢复正常;注意集中性恢复至正常范围时尿液中氯胺酮最高浓度为5.096ng/mL、去甲氯胺酮最高浓度为14.438ng/mL,需戒断15d注意集中性才可恢复正常。结论：本文利用UFLC-MS/MS技术,建立了简单快速、科学有效、特异性好、准确度高,稳定性好的UFLC-MS/MS法,用于测定尿液中氯胺酮及其代谢产物去甲氯胺酮的浓度,并成功将其应用于尿液中氯胺酮、去甲氯胺酮消除规律的研究中；利用PsyTech心理实验系统,建立了完善的心理实验以测试人群反应时、速度知觉和注意集中性等驾驶相关心理,并成功运用于研究氯胺酮滥用对驾驶相关心理的影响。(1)运用UFLC-MS/MS法测定人尿液中氯胺酮及其代谢产物去甲氯胺酮的浓度成果显著。首先,Shim-pack FC-ODS超快速色谱柱相对于普通色谱柱分离效能及分离速度更高,同时测定尿液中氯胺酮及其代谢产物去甲氯胺酮,每个样品的测试时间仅需5min,样品通量大大提高；其次,OMRM模式下能够同步检测母离子和具有特征反应的字离子,母离子被碰撞,特定子离子被检测,显著降低了背景噪音,因而具有高度的特异性和准确度,氯胺酮、去甲氯胺酮的定量下限均为0.10ng/mL;再者,选择氯胺酮氘代物作内标物,增强定量检测过程中的稳定性。此外实验中样品前处理方法为液液萃取法,简便、快捷、经济,适用于高通量样本的分析。结果显示,氯胺酮滥用人群尿液中氯胺酮、去甲氯胺酮浓度与戒断时间成反比,氯胺酮被清除以后尚有去甲氯胺酮残留,故在进行氯胺酮滥用检测分析时,应注重代谢物的检测分析。(2)利用PsyTech-EP2009型心理实验平台对实验组和对照组的视觉简单反应时、听觉简单反应时、视觉选择反应时、听觉选择反应时、视觉反应时(脚)、听觉反应时(脚)、速度知觉和注意集中性等心理指标进行测试,已取得理想结果。首先对实验员进行培训、考核,确保实验的质量；其次采集数据前实验员协助实验对象进行充分的练习实验,实验对象使用唯一用户名登陆系统,确保实验数据的真是可靠。此外,反应时、速度知觉和注意集中性等几个心理指标,已被广泛应用于饮酒对驾驶心理影响等研究中。说明本方法的建立满足实验需求,并成功运用于氯胺酮滥用对驾驶相关心理影响的研究中。实验结果显示,当人群吸食氯胺酮后,对光、声等刺激做出反应的时间变长,对速度感觉的准确性变差,注意集中性水平变低,其氯胺酮浓度越高,效应越强；有关研究表明,事故多发驾驶员的反应时比安全驾驶员的长,速度估计平均绝对误差比安全驾驶员的大,注意集中性比安全驾驶员的差。同时,结果还表明,氯胺酮未被完全清除时,视觉选择反应时可恢复正常；氯胺酮被完全清除,去甲氯胺酮未被完全清除时,听觉反应时(脚)可恢复正常；氯胺酮、去甲氯胺酮均被完全清除时,视觉简单反应时、听觉简单反应时、听觉选择反应时、视觉反应时(脚)、速度判断的准确性和注意集中性均未恢复正常,依旧受到影响。综上所述,驾驶员吸食氯胺酮后进行驾驶机动车行为,更容易发生交通事故,且吸食量越多,发生交通事故的可能性越大；即便体内氯胺酮、去甲氯胺酮被完全清除,3天内驾驶依旧会受到影响。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R749.64

【参考文献】