靶向hTERT、hTR新型RNAi表达框架的构建及应用效果观察

发布时间：2018-03-18 07:47

  本文选题：末端转移酶端粒　切入点：RNA干扰　出处：《中国普通外科杂志》2016年12期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：目的:构建靶向hTERT、hTR的新型RNAi表达框架,探讨单独及联合干扰hTERT、hTR基因对肿瘤细胞端粒酶活性、细胞凋亡及周期的影响,以期找到肿瘤基因治疗的新策略。方法:融合PCR构建靶向hTERT、hTR的RNAi表达框架。各表达框架经鉴定后分别或联合转染A549细胞,TRAP-银染法及TRAP-q PCR法检测端粒酶活性,流式细胞仪检测细胞凋亡及周期。结果:靶向hTERT、hTR的新型RNAi表达框架构建成功。与空白对照组或阴性对照组比较,无论转染靶向hTERT或靶向hTR的RNAi表达框架后,A549细胞的端粒酶活性均明显降低,细胞凋亡率均明显增加,细胞G1阻滞明显增加,而联合转染靶向hTERT与靶向hTR的RNAi表达框架后,A549细胞的上述改变较各自单独转染更为明显(均P0.05)。结论:靶向hTERT、hTR的新型RNAi表达框架能够有效抑制A549细胞的端粒酶活性,诱导细胞凋亡,改变细胞周期。以人工mi RNA表达框架为基础的新型RNAi技术有望成为肿瘤基因治疗的新工具。
[Abstract]:Aim: to construct a novel RNAi expression framework targeting hTERTR, and to investigate the effects of alone and combined interference of hTERThTR gene on telomerase activity, apoptosis and cell cycle in tumor cells. Methods: PCR was fused to construct a RNAi expression framework targeting hTERTTR. The telomerase activity in A549 cells was detected by TRAP-silver staining and TRAP-q PCR after identification or co-transfection of each frame. Results: a novel RNAi expression frame targeting hTERTTR was successfully constructed, which was compared with that of blank control group or negative control group. The telomerase activity of A549 cells was significantly decreased, the apoptosis rate was significantly increased, and G1 arrest was significantly increased, regardless of the RNAi expression frame transfected with targeted hTERT or targeted hTR. These changes were more obvious in A549 cells after co-transfection of RNAi expression frame targeting hTERT and hTR (all P0.05A). Conclusion: the novel RNAi expression framework targeting hTERThTR can effectively inhibit telomerase activity of A549 cells. The new RNAi technique based on artificial mi RNA expression framework is expected to be a new tool for tumor gene therapy.
【作者单位】： 中南大学湘雅医学院医学检验系;
【基金】：中南大学研究生科研创新基金资助项目(2016zzts500);中南大学本科生自由探索基金资助项目(201610533579)
【分类号】：R730.5;R450

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