基于全菌消减SELEX技术的体外筛选大肠埃希菌O157:H7适配体研究

发布时间：2018-04-04 16:02

  本文选题：大肠埃希菌O　切入点：H　出处：《环境与健康杂志》2016年01期

【摘要】：目的筛选出能特异性识别大肠埃希菌O157:H7的单链DNA(ss DNA)适配体并进行鉴定。方法利用全菌消减SELEX技术,以完整菌体为靶标菌和消减菌,通过体外筛选方法筛选出大肠埃希菌O157:H7特异性ss DNA适配体。利用荧光分光光度计、激光共聚焦显微镜、克隆测序、Chromas和DNAMAN分析软件,分析适配体的一、二级结构,并对筛选得到的适配体进行特异性鉴定。结果经过7轮全菌消减SELEX筛选,荧光分光光度计检测结果鉴定第六轮文库富集达到饱和;通过测序分析、荧光分光光度计和激光共聚焦显微镜特异性检测,获得1条与大肠埃希菌O157:H7特异性结合的适配体Aptamer1。结论利用全菌消减SELEX技术成功筛选获得大肠埃希菌O157:H7特异性ss DNA适配体。
[Abstract]:Objective to screen and identify a single strand DNA(ss DNA aptamer that can specifically recognize Escherichia coli O157:H7.Methods by means of full-bacterial subtractive SELEX technique, the specific SS DNA aptamer of Escherichia coli was screened by screening in vitro with intact bacteria as target and subtractive bacteria.The first and secondary structures of the aptamer were analyzed by fluorescence spectrophotometer, laser confocal microscope, clone sequencing and DNAMAN analysis software, and the specific identification of the aptamer was carried out.Results after 7 rounds of subtractive SELEX screening, the results of fluorescence spectrophotometer confirmed that the sixth round library was enriched to saturation, and the specificity of fluorescent spectrophotometer and laser confocal microscope was detected by sequencing analysis.An aptamer 1 was obtained which specifically binds to Escherichia coli O157:H7.Conclusion O157:H7 specific ss DNA aptamer of Escherichia coli was successfully screened by subtractive SELEX.
【作者单位】： 南昌大学公共卫生学院;军事医学科学院卫生学环境医学研究所天津市环境与食品安全风险监控技术重点实验室;
【基金】：国家自然科学基金(81270041)
【分类号】：R446.5

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本文编号：1710663