耐碳青霉烯类不动杆菌的耐药机制与分子流行病学研究

发布时间：2018-11-10 14:28

【摘要】：目的:1.了解福州市临床分离的耐碳青霉烯类不动杆菌耐药性的产生与B类和D类碳青霉烯酶之间的关系。2.探讨A类碳青霉烯酶、外膜孔蛋白和外排泵在携带NDM-1型基因的耐碳青霉烯类不动杆菌中的作用。3.研究NDM-1、NDM-6及NDM-9型酶对亚胺培南的水解能力。4.研究福州市临床分离的耐碳青霉烯类不动杆菌的分子流行病学特点。方法:1.收集2010年9月~2014年8月福州市临床分离的391株非重复的耐碳青霉烯类不动杆菌,采用VITEK-2 compact全自动微生物分析仪进行菌种鉴定和药敏试验,然后通过K-B法验证菌株对亚胺培南的耐药性。通过42℃生长实验、OXA-51-like基因检测和rpoB基因序列分析进行菌种鉴定。PCR法检测B类和D类碳青霉烯酶基因。2.对携带有NDM-1型基因的不动杆菌,运用PCR法筛查A类碳青霉烯酶基因、外膜孔蛋白基因和外排泵基因。构建含NDM-1、NDM-6及NDM-9型酶的pCR 2.1载体,导入TOP10感受态细胞中,利用琼脂稀释法测定不同类型重组菌对亚胺培南的最小抑菌浓度值。3.利用DiversiLab细菌DNA指纹图谱分析系统对福州市临床分离的50株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌、5株Pittii不动杆菌和3株Nosocomialis不动杆菌进行基因分型。在50株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌中,39株来自福建医科大学附属协和医院,9株来自福建医科大学附属第一医院,2株来自南京军区福州总医院。5株Pittii不动杆菌和3株Nosocomialis不动杆菌均来自福建医科大学附属协和医院。结果:1.①391株耐碳青霉烯类不动杆菌中,382株为鲍曼不动杆菌,5株为pittii不动杆菌,4株为nosocomialis不动杆菌。②在382株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌中,oxa-23-like基因阳性率为93.46%(357株),oxa-24-like基因阳性率1.05%(4株),oxa-58-like基因阳性率0.52%(2株),均未检出oxa-143-like基因;2株检出ndm-1型基因。③在5株pittii不动杆菌中,2株检出oxa-58-like基因,5株均未检出oxa-23-like、oxa-24-like及oxa-143-like基因;5株均检出ndm-1型基因。④在4株nosocomialis不动杆菌中,4株均未检出oxa-23-like、oxa-24-like、oxa-58-like及oxa-143-like基因;3株检出ndm-1型基因。⑤该391株耐碳青霉烯类不动杆菌的其余金属β-内酰胺酶基因筛查结果均为阴性。2.①在2株携带ndm-1型基因的鲍曼不动杆菌中,1株检出oxa-23-like基因,均未检出其它碳青霉烯酶基因;2株均检出外膜孔蛋白caro基因,1株检出外膜孔蛋白oprd基因;2株均检出adeb、adei、adej及adek基因。②在5株携带ndm-1型基因的pittii不动杆菌中,2株检出oxa-58-like基因,均未检出其它碳青霉烯酶基因;5株均检出外膜孔蛋白oprd基因,5株均未检出外膜孔蛋白caro基因;5株均检出外排泵adei、adek基因,4株检出adej基因,1株检出adeb基因。③在3株携带ndm-1型基因nosocomialis不动杆菌中,均未检出其它碳青霉烯酶基因;3株均检出外膜孔蛋白caro、oprd基因;3株均检出外排泵adeb、adei、adej及adek基因。④以上10株携带ndm-1型基因的不动杆菌,均未检出外排泵调节基因ades。⑤表达ndm-1、ndm-6及ndm-9酶的重组菌,对亚胺培南的mic值分别为32、128和64μg/ml。3.福州市50株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌可分为a~g七个型别,其中a、b、e和g型各1株,c型4株,d型7株,f型35株。5株pittii不动杆菌和3株nosocomialis不动杆菌可分为a和b两型。结论:1.福州市临床分离的耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制主要与产oxa-23-like碳青霉烯酶相关。2.第一次在耐碳青霉烯类pittii不动杆菌中同时检出ndm-1型基因与oxa-58-like基因。3.第一次在福建省内发现携带OXA-24-like、OXA-58-like和NDM-1型基因的耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌。4.NDM-1型基因阳性的Pittii不动杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药主要可能是由外膜孔蛋白CarO缺失,AdeIJK外排泵及NDM-1酶共同作用的结果。而NDM-1型基因阳性的Nosocomialis不动杆菌与鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药可能主要与AdeIJK外排泵及和NDM-1酶有关。5.NDM-1、NDM-6及NDM-9酶水解亚胺培南能力从强到弱依次为NDM-6、NDM-9和NDM-1酶。6.福州市流行的耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的基因型为F型。在福建医科大学附属协和医院烧伤ICU和综合ICU流行的耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的基因型不同,前者为D型,后者为F型。
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【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R446.5

【参考文献】