基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱快速鉴别耐药细菌的研究

发布时间：2019-05-30 06:52

【摘要】：目的:评价基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-flight Mass Spectrometry,MALDI-TOF MS)VITEK MS对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和耐万古霉素屎肠球菌的快速鉴别能力。方法:收集279株金黄色葡萄球菌临床分离株,应用VITEK MS质谱仪鉴定菌种,苯唑西林和头孢西丁纸片扩散法初筛耐药菌株,聚合酶链式反应(PCR)检测mec A基因。采用VITEK MS建立甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)的数据库(Super Spectra),获得两组用于区分的特征峰,并应用临床菌株对新建立的Super Spectra进行验证。同样收集196株屎肠球菌临床菌株,VITEK MS进行菌种鉴定,万古霉素和替考拉宁纸片扩散法初筛耐药菌株,PCR检测万古霉素耐药基因(包括van A、van B和van M)。采用VITEK MS建立万古霉素耐药屎肠球菌(VRE)和万古霉素敏感屎肠球菌(VSE)的Super Spectra,获得两组用于区分的特征峰,并应用临床菌株对新建立的Super Spectra进行验证。结果:收集的279株金黄色葡萄球菌临床菌株中275株经VITEK MS确认为金黄色葡萄球菌,其中143株经纸片法药物敏感性和PCR扩增试验证实为甲氧西林耐药且携带mec A基因,132株为甲氧西林敏感菌株且不携带mec A基因,纸片扩散法和mec A基因检测符合率为100%。随机采集66株MRSA临床菌株和1株标准菌株ATCC43300的质谱指纹图谱建立MRSA Super Spectra,随机采集64株MSSA临床菌株和2株标准菌株(ATCC25923、ATCC29213)的质谱指纹图谱建立MSSA Super Spectra,比对MRSA和MSSA Super Spectra得到两个质荷比为2305.6Da和3007.3Da的MRSA特征峰,而质荷比为6816.7Da的峰为MSSA特有的响应值较高的峰,验证结果显示该方法对MRSA鉴定准确率达84.21%,对MSSA的鉴定准确率达90.91%,对于金黄色葡萄球菌是否耐药的鉴定总的准确率为87.32%。收集的196株屎肠球菌临床菌株经质谱鉴定均为屎肠球菌,其中105株经纸片法药物敏感性和PCR扩增试验证实为VRE(66株携带van A基因,39株携带van M基因),91株为敏感菌株,纸片扩散法和PCR结果符合率为100%。随机采集62株临床耐药株和58株临床敏感株的质谱指纹图谱分别建立VRE Super Spectra和VSE Super Spectra,比对两个Super Spectra发现,6601.4 Da处的峰为VRE特征峰,而3723.9 Da和3883.1 Da处的峰为VSE的两个特征峰,临床菌株验证表明该方法对VRE的鉴定准确率为88.37%,VSE准确率为75.76%,对于屎肠球菌是否耐药的总鉴定准确率为82.89%。结论:VITEK MS可以通过采集耐药菌株和敏感菌株的质谱指纹图谱从而建立耐药和敏感菌株Super Spectra,得到耐药株和敏感株的特征峰,激活后的Super Spectra即可实现对单个菌株的耐药性的快速鉴别,该方法快速准确,将对临床耐药菌株鉴定产生革命性影响。
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【学位授予单位】：浙江工业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R446.5

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