健康新生儿粪便中耐铅菌株的分离鉴定及铅吸附实验

发布时间：2019-11-08 00:09

【摘要】：目的分离、鉴定具备重金属铅抗性、铅吸附性的乳酸菌,为成为具有排铅功能的新型保健食品提供新的菌源。方法利用乳酸菌选择性培养基MRS,从30份健康、足月新生儿粪便分离耐铅菌,通过形态特征,16S rRNA测序,构建系统发育树;利用《伯杰氏系统细菌学手册》进行生理生化、药敏检测和耐酸耐胆盐试验;进一步通过ICP-OES法检测分离菌对铅离子的吸附能力。结果分离得到3株可耐受500 mg/L铅离子浓度的干酪乳杆菌,均对青霉素、头孢曲松敏感。耐酸耐胆盐试验显示p H 2.0人工胃液培养3 h,细菌数保持相同数量级,0.3%的胆盐环境8 h存活率可达62.5%。吸附实验表明对低浓度(1 mg/L)铅离子的吸附率高达90.4%,对高浓度(50 mg/L)铅离子的吸附率可达86.27%。结论从新生儿粪便中分离到3株具备铅抗性、铅吸附性、耐酸耐胆盐的干酪乳杆菌,为利用益生菌膳食策略缓解铅中毒效应开辟新的途径和解决方案。
【图文】：

JSouthMedUniv,2016,36(12):1602-1608http://www.j-smu.com均呈乳白色，湿润，圆形凸起，边缘整齐，直径约1~2mm，光镜下观察均为革兰阳性，杆状，无芽孢，与标准菌株ATCC7469染色性一致（图1）。图1耐铅菌株的革兰染色Fig.1Gramstainingresultsofthelead-resistantstrains(Oil,originalmagnification:×100).A:SYF-B;B:SYF-E;C:SYF-I;D:ATCC7469.ABCD2.3耐铅菌株的鉴定对筛选的3株耐铅菌株提取基因组DNA，进行PCR扩增，目的位置可见清晰条带，如图2所示。菌株SYF-B，SYF-E，SYF-I的PCR产物送上海生工生物技术有限公司测定16SrRNA序列，进行BLAST比对。结果表明3株菌株与干酪乳杆菌（Lactobacilluscasei）不同菌株的16SrRNA序列高度同源。分别达到100%，99%和100%（表2）。采用软件MEGA7.0中的Neighbor-joining法构建16SrRNA序列系统发育树，结果与BLAST分析一致。分离菌株和干酪乳杆菌菌株聚为一簇（图3），，表明它们亲缘关系最近。结合菌落特征、细菌形态特征与16SrRNA序列分析结果，3株菌株均鉴定为干酪乳杆菌（Lactobacilluscasei）菌种。2.4生理生化实验参照《伯杰氏系统细菌学手册》有关干酪乳杆菌的描述，进行生理生化试验，结果表明，3株菌均符合干酪乳杆菌的生物学特性，为干酪乳杆菌非鼠李糖亚种（表3）。2.5药敏试验结果试验显示3株耐铅菌株对庆大霉素均不敏感，对青霉素、头孢曲松均敏感，表明基础抗生素青霉素即可有效抑制其生长（图4）。图2菌株SYF-B,SYF-E,SYF-I的16SrDNA的PCR产物Fig.2GelelectrophoresisofPCR-amplifiedfragments.M:Marker;0:Control;1,2:SYF-B;3,4:SYF-El;5,6:SYF-I.M0123456bp20001000750500250表2耐铅菌株的16SrRNA序列分析Tab.216SrRNAsequenceanalysisoflead-resist

JSouthMedUniv,2016,36(12):1602-1608http://www.j-smu.com均呈乳白色，湿润，圆形凸起，边缘整齐，直径约1~2mm，光镜下观察均为革兰阳性，杆状，无芽孢，与标准菌株ATCC7469染色性一致（图1）。图1耐铅菌株的革兰染色Fig.1Gramstainingresultsofthelead-resistantstrains(Oil,originalmagnification:×100).A:SYF-B;B:SYF-E;C:SYF-I;D:ATCC7469.ABCD2.3耐铅菌株的鉴定对筛选的3株耐铅菌株提取基因组DNA，进行PCR扩增，目的位置可见清晰条带，如图2所示。菌株SYF-B，SYF-E，SYF-I的PCR产物送上海生工生物技术有限公司测定16SrRNA序列，进行BLAST比对。结果表明3株菌株与干酪乳杆菌（Lactobacilluscasei）不同菌株的16SrRNA序列高度同源。分别达到100%，99%和100%（表2）。采用软件MEGA7.0中的Neighbor-joining法构建16SrRNA序列系统发育树，结果与BLAST分析一致。分离菌株和干酪乳杆菌菌株聚为一簇（图3），表明它们亲缘关系最近。结合菌落特征、细菌形态特征与16SrRNA序列分析结果，3株菌株均鉴定为干酪乳杆菌（Lactobacilluscasei）菌种。2.4生理生化实验参照《伯杰氏系统细菌学手册》有关干酪乳杆菌的描述，进行生理生化试验，结果表明，3株菌均符合干酪乳杆菌的生物学特性，为干酪乳杆菌非鼠李糖亚种（表3）。2.5药敏试验结果试验显示3株耐铅菌株对庆大霉素均不敏感，对青霉素、头孢曲松均敏感，表明基础抗生素青霉素即可有效抑制其生长（图4）。图2菌株SYF-B,SYF-E,SYF-I的16SrDNA的PCR产物Fig.2GelelectrophoresisofPCR-amplifiedfragments.M:Marker;0:Control;1,2:SYF-B;3,4:SYF-El;5,6:SYF-I.M0123456bp20001000750500250表2耐铅菌株的16SrRNA序列分析Tab.216SrRNAsequenceanalysisoflead-resist

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