血清雌二醇标准物质与四种嘌呤核苷类标准物质的研制

发布时间：2020-01-21 10:53

【摘要】：近年来,随着检测技术的发展,血清雌二醇和四种嘌呤核苷类物质成为新的指标应用于临床,因此其相关领域的检测也急剧增加,需求日益广泛,为保证临床检验的标准化,本文研制了血清雌二醇和四种嘌呤核苷类标准物质以满足临床检测需求。在血清雌二醇基体标准物质研制过程中,建立了同位素稀释液相色谱串联质谱法(ID-LC/MS/MS)准确测定血清中雌二醇的含量,使用电喷雾三重四级杆串联质谱多重反应监测模式(MRM),通过优化色谱质谱参数,确定最佳的仪器分析条件。实验优化了血清样品的前处理条件,包括比较不同的雌二醇内标物、添加提取剂、萃取前血清所需的pH值、摸索淋洗条件以及平衡时问等,使雌二醇的提取效果最好,建立了合适的样品制备路线。并进一步对血清样品进行均匀性检验、稳定性监测以及不确定度评定,并进行了方法学验证(精密度、准确性、线性关系、检测限等)；采用2013IFCC RELA比对(JCTLM)样品和欧洲标准局标准物质血清17β-雌二醇标准物质进行了方法验证,测量结果溯源到JCTLM认可的标准物质,保证了标准物质的溯源性和量值的准确,从而完成了血清雌二醇基体标准物质的研制。本文结合国内外相关研究技术基础,采用红外光谱法和质谱法对四种嘌呤核苷类样品主成分进行了定性分析；通过优化分析实验条件完成了基于高效液相色谱的质量平衡法与定量核磁共振法两种不同原理的定值分析方法,同时完成了水分、灰分及无机离子含量的测定；并进一步对四种嘌呤核苷类标准物质进行了均匀性检验、稳定性监测以及不确定度的评定。结果表明,四种嘌呤核苷类标准物质纯度较高,其中鸟苷纯度为90.89%,扩展不确定度0.56%(k=2)：2'-脱氧鸟苷纯度为94.51%,扩展不确定度0.34%(k=2)；8-羟基-鸟苷纯度为94.22%,扩展不确定度0.34%(k=-2)；8-羟基-2'-脱氧鸟苷纯度为91.02%,扩展不确定度0.28%(k=2)：四种标准物质均匀性良好且一年范围监测稳定性良好。血清中雌二醇基体标准物质的研制填补了国内空白,四种嘌呤核苷类纯度标准物质的研制填补了国际空白,该类临床用标准物质的研制可用于相关成分的测定、分析仪器的校准、分析方法的确认及相关生产部门和实验室的质量控制等。
【图文】：

离子色谱,雌二醇,离子色谱,标记物

北京交通大学硕士学位论文表2-4液相色谱分析条件Table 2-4 The liquid chromatographic conditions 色谱优化条件优化结束色谱柱 Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18(2.1 X ISOmm, Sum)色进柱温度 30T：流动相 A: B=H20： ACN梯度洗脱释序 0—15min, 40%—100%B； 15—17min,100%B； 17—22min, 100%—40%B流速 0.3 mL/min 进样镇

高效液相色谱,高效液相色谱,脱氧鸟苷,样品

图3-15 8-?基-?符样品的高效液相色谱阁Fig.3-15 The HPLC figure of 8-oxo-Guanosine sample8-经基-2’-脱氧鸟苷(8"Oxo-2'-deoxyguanosine )高效液相色谱条件的优化：考察了 + 同类型的色谱柱—Atlantis Waters Atlantis dC18 (5 |xm, 2.1x150 mm)柱、Aglient SB C18 (5 nm，4.6x150 mm)柱、Aglient Eclipse C18 (5 nm, 4.6x250 mm)柱--对8-经基-21-脱氧鸟哲纯品的纯度测定效果，检测的谱阁结来显示主峰峰型都比较拖尾，相比而言Aglient Eclipse C18柱分离效果明显较好于另外两柱；通过紫外吸收光谱全扫描可知8-经基-2'-脱氧鸟苗的最大吸收波长为250 nm,在此甚础上分别对流动相比例和流动相所需的pH值进行了优化，流动相分别考察了纯甲醇与纯水相以及分别加入了 50 mmola愃岫#钾的（pH=3.5)的流动相，两种条件下高效液相色谱峰型均较好，但8-径基-2'-脱氧鸟苗样品在酸性条件下不稳定，最终选择了纯甲醇与纯水相为流动相，流动相有机相甲醇与纯水相的比例为10： 90时峰型最好；流速为l.OmL/min;将1 mg样品溶于1 mL溶剂中，，溶解样品的溶剂分别选用纯水、二甲基亚砜（DMSO)、0.1%甲酸水溶液，8-经基-2?-脱
【学位授予单位】：北京交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R446.11;O652.3

【参考文献】