【摘要】：目的:建立化疗大鼠压疮模型和普通大鼠压疮模型,提取大鼠血液和受压皮肤和肌肉组织,通过酶联免疫法(Elisa)检测血浆hs-CRP(超敏C)蛋白水平、免疫印迹(WB)检测血清及组织液中的TNF-a(肿瘤坏死因子)、IL-6(白细胞介素-6)蛋白表达,结合病理切片光镜观察进行组间比对,研究化疗大鼠压疮的易感性,以及TNF-a、IL-6和hs-CRP蛋白在大鼠模型中的表达及作用机制,探讨压疮发生的影响因素,寻找可以预测化疗大鼠压疮发生的敏感指标,为临床化疗病人压疮的预防提供借鉴。方法:将80只健康SD大鼠随机分为空白组(n=10只)、实验对照组(n=30)和实验组(n=40)。实验对照组使用压力装置作用于大鼠的股薄肌,施予34.7k Pa压强,施压2 h和移除0.5 h的方式模拟缺血再灌注过程,以2.5 h为一个循环,30只大鼠对应进行2、3、4个I/R(缺血-再灌注)循环建立不同程度损伤的大鼠压疮模型,而实验组先通过腹腔注射5-FU(氟尿嘧啶),按首次剂量125mg·kg-1,次日起连续3d维持62.5mg·kg-1·d-1剂量建立化疗模型,观察大鼠期间外部体征变化。化疗模型建立成功后再进行2、3、4个I/R循环建立大鼠压疮模型,压疮模型的制作方法与实验对照组一致,空白组同期饲养,不做任何处理。实验后三大组大鼠分别进行眼眶采血和受压组织提取,全血分别加入抗凝管和干燥管离心提取上清液,部分受压组织捣碎研磨后加入蛋白裂解液裂解,离心,加入蛋白上样缓冲液,100℃加温4 min变性后-80℃冰箱保存待检测,用Elisa检测血浆中的hs-CRP蛋白含量,WB(免疫印迹)检测血清及组织液中的TNF-a、IL-6蛋白表达量,而受压的皮肤和部分组织用于HE染色,病理切片光镜观察进行组间比较。结果:1、肉眼及光镜观察:在同一压强(34.7k Pa)和同一缺血再灌注循环次数下(I/R2、I/R3、I/R4)下,化疗组大鼠在皮肤受压后压红范围较普通压疮组大鼠大,且皮肤周围出现红点较多。化疗组大鼠复层上皮结构普遍变薄,层次不清,重度损伤时部分上皮结构消失。皮肤附属结构更少,受压时真皮胶原易出现变性、重度损伤时溶解较严重,炎性细胞浸润更明显,看不到脂肪颗粒,血管充血瘀滞,血管壁变厚,肿大。在同等10倍镜下视野中普通压疮组只能观察到皮肤或肌肉组织,而化疗组由于表皮变薄,耐受性降低,在同一视野下可同时观察到皮肤和肌肉组织,表皮与真皮、皮肤与肌肉组织剥离情况较明显,肌肉组织间隙增宽,更易出现溶解断裂情况。根据皮肤肌肉组织光镜下的分级标准将大鼠进行损伤程度分级,统计每组轻度损伤、中度损伤、重度损伤的例数并进行组间比较,差异有统计学意义(χ2=62.309,P0.01),其中实验组(即化疗组)大鼠出现重度损伤的总例数为13例,实验对照组为3例,实验组出现的重度损伤大鼠的例数远远高于实验对照组。2、以化疗大鼠化疗结束后第7天的体质量(X1)、红细胞(X2)、白细胞(X3)、血小板(X4)计数为自变量,皮肤肌肉损伤程度分级Y为因变量进行多元逐步回归分析,分析大鼠皮肤肌肉损伤程度的影响因素,其中白细胞计数这个自变量P0.05,拟合方程成立。此时40只化疗白细胞的计数均低于正常组及实验前计数的30%以上,回归方程Y=4.918-0.298·X3,可认为白细胞计数低于正常30%以上是皮肤肌肉损伤加重的主要影响因素。3、在同一压强(34.7kPa)和同一缺血再灌注循环(I/R2、I/R3、I/R4)次数下,化疗+I/R组大鼠较I/R组和空白组大鼠血浆hs-CRP蛋白含量更高,组间比较,差异有统计学意义(P0.05)。4、在同一压强(34.7k Pa)和同一缺血再灌注循环(I/R2、I/R3、I/R4)次数下,化疗+I/R组大鼠血清及组织液中TNF-α的条带普遍要比空白组和I/R组条带粗,灰度值更高,表达量也普遍比后两者高,其次到I/R组,组间比较,差异有统计学意义(P0.05)。5、在同一压强(34.7k Pa)和同一缺血再灌注循环(I/R2、I/R3、I/R4)次数下,I/R4组及化疗+I/R4组大鼠血清中IL-6的条带普遍要比空白组和其它实验组条带粗,其中单纯I/R组普遍比化疗+I/R组表达量高,组间比较,差异有统计学意义(P0.05),经研究推测与化疗组血液中的白细胞等免疫细胞减少导致IL-6分泌减少原因有关。而在大鼠组织液中IL-6的条带,化疗+I/R组普遍比单纯I/R组及空白组条带粗,表达量更高,组间比较(P0.05),差异有统计学意义。6、与皮肤损伤程度的spearman相关分析当中,大鼠血浆hs-CRP蛋白与皮肤损伤程度呈高度相关(相关系数为r=0.860,P0.01);大鼠血清及组织液TNF-α的表达量变化与与皮肤损伤程度呈中度相关(相关系数分别为:r1=0.320,P0.01;r2=0.657,P0.01);大鼠血清及组织液IL-6的表达量变化与与皮肤损伤程度分别呈低度、中度相关(相关系数分别为:r3=0.294,P0.01;r4=0.467,P0.01)。在本研究中,大鼠血浆hs-CRP和组织液TNF-a表达量变化与皮肤损伤的相关性更大。结论:1、与空白组,普通压疮组大鼠相比较,化疗后的大鼠皮肤受压后更容易破损,皮肤耐受性更低,组织损伤程度更重,该损伤加重与化疗大鼠鳞状上皮结构缺失、皮下脂肪层缺失有关外,也与大鼠缺血再灌注之后诱发机体应激反应,炎性因子表达量增高有关,hs-CRP、TNF-a、IL-6被释放出来共同参与炎症反应,且hs-CRP的含量及TNF-a的表达量均高于非化疗组大鼠。2、化疗药物输注之后,当白细胞计数低于正常的30%以上时,大鼠免疫力降低,发生压疮的风险将会增高。3、血浆中hs-CRP蛋白含量及组织液中的TNF-a的表达量变化,对压疮的发生有一定的预测作用。两个指标含量或表达量越高,压疮发生的风险更大。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R472
【图文】：
23图 1-1 正常 SD 大鼠 图 1-2 大鼠化疗停药后第 1 天 图 1-3 大鼠化疗停药后后第 7 天正常大鼠毛色光泽，目光有神，反应灵敏，活动敏捷。化疗完成停药后的第 1 天，大鼠活动量减少，眼神呆滞，反应迟钝，开始出现便溏血便的情况。化疗完成停药后的第 7 天，大鼠萎靡，喜欢扎堆弓背，毛色枯槁，反应迟钝，大便便溏，体重减轻，腹部出现腹水。
23图 1-1 正常 SD 大鼠 图 1-2 大鼠化疗停药后第 1 天 图 1-3 大鼠化疗停药后后第 7 天正常大鼠毛色光泽，目光有神，反应灵敏，活动敏捷。化疗完成停药后的第 1 天，大鼠活动量减少，眼神呆滞，反应迟钝，开始出现便溏血便的情况。化疗完成停药后的第 7 天，大鼠萎靡，喜欢扎堆弓背，毛色枯槁，反应迟钝，大便便溏，体重减轻，腹部出现腹水。
23图 1-1 正常 SD 大鼠 图 1-2 大鼠化疗停药后第 1 天 图 1-3 大鼠化疗停药后后第 7 天正常大鼠毛色光泽，目光有神，反应灵敏，活动敏捷。化疗完成停药后的第 1 天，大鼠活动量减少，眼神呆滞，反应迟钝，开始出现便溏血便的情况。化疗完成停药后的第 7 天，大鼠萎靡，喜欢扎堆弓背，毛色枯槁，反应迟钝，大便便溏，体重减轻，腹部出现腹水。
【参考文献】
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本文编号：
2806995
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