“五苓痛风丸”治疗高尿酸血症和痛风的疗效及相关机理研究

发布时间：2019-11-08 17:28

【摘要】：目的：2000年6月,我时年61岁公教人员退休时,满怀想过退休安闲自在的生活。没想到第二年常觉得胸闷心悸现象,经长庚医院心脏内科诊断为冠心病,同年11月作心脏搭桥手术,从此长期服用降血压药氯沙坦、预防狭心症发作药消心痛、防心肌梗塞及血栓塞症药阿司匹林等西药,虽心脏恢复功能,但肾功能逐年下降,且并发了高尿酸血症、痛风、糖尿病及输尿管结石等病证。想起父亲为中医师,拟以中药调理治疗,副作用较少,故2010年9月考入广州中医药大学学中医。在2013年9月份博士班就读时痛风发作,以吴同学的痛风经验方,服后疼痛稍为缓解。又见近来国内经济繁荣,生活水平提升,饮食文化受西式速食文化的冲击,摄取高嘌呤、高蛋白等物质引起高尿酸血症及痛风,且患者年龄层逐年下降之隐忧。有鉴于此,拟“五苓痛风丸对高尿酸血症及痛风疗效的实验与临床研究”为课题。在梳整中国历代古籍文献,自《黄帝内经·灵枢》称痛风为贼风、痹证、历节等病名至金元时代,统合痛风病名、症状、证型、论治及方药,属于中医痹证范畴。几千年流传后世经方,历经时代大临床验证其疗效,此为中医药治疗优势。为验证其效力,特以中药浓缩剂及中药颗粒剂,以五苓痛风丸对高尿酸血症及痛风疗效动物实验与临床实验之研究,整理中医药治疗痛风的文献,探讨五苓痛风丸治疗高尿酸血症和痛风的疗效及相关机理。方法：1文献研究：本研究方法主要采取探讨中医古藉,历史纵向与相关痹证、贼风、历节、痛风疾病作为横向,纵横探讨加以归纳整理,梳理历代医者关于痛风的病机描述和辨证论治及方药。2.动物实验：(1)大鼠急性痛风性关节炎造模方法,取60只Wistar雄性大鼠(200±20g),称重后随机分成空白组、模型组、阳性组(扶他林0.39mg/ml)、中药高、中、低剂量组等6组。中药各剂量组于造模前3天连续ig给药；阳性组于造模前2天连续ig给药。除空白组外其余均将0.2ml尿酸钠溶液注入到踝关节腔,形成急性痛风性关节炎模型。(2)细胞实验：①造模方法：摸索尿酸盐的造模浓度和造模时间：培养大鼠原代滑膜细胞,培养基中加入高中低(700,1000,l,400uM)三种浓度的尿酸盐,检测滑膜细胞内VCAM-1的表达,。②“五苓痛风丸”含药血清的制备：A.摸索中药的给药浓度和给药时间,检测VCAM-1水平,PCR或WB。B.培养大鼠原代滑膜细胞造模及细胞分组。3.临床实验：(1)病例来源于2015年10月至2016年01月就诊于广州中医药大学第一附属医院肾病科门诊患者18例及深圳市吴邱保西医内科诊所患者12例并依照随机取样,共30例,以患者前后服用中西药为对照研究。(2)治疗方法：①饮食疗法。②中医治疗：采用“五苓痛风丸”。A.主要组成：茵陈五苓散及上中下通用痛风丸合成复方加减。B.服法：急性痛风发作时,每日28克,分二次服/或14g bid,每次用热开水约100毫升冲溶,饭前一小时口服。③西药治疗：服用A.苯溴马隆、B.别嘌呤醇片、C.碳酸氢钠片、D.秋水仙碱片等治疗。内容：1动物实验内容：“五苓痛风丸”对急性痛风性关节炎大鼠模型的作用研究：(1)造模时间：于2015年5月5日-2015年5月19日。(2)造模方法：取60只Wistar雄性大鼠(200士20g),实验分6组,每组5只大鼠。①空白组及②模型组：各以生理盐水灌胃,每天1次,共5天。③扶他林组：以双氯芬酸钠混悬液(0.39mg/ml)灌胃,每天1次,共5天。④中药高剂量组：以中药浓缩剂五苓痛风丸高浓度28g溶液灌胃,每天1次,共5天。⑤中药中剂量组：以中药浓缩剂五苓痛风丸中浓度20g溶液灌胃,每天1次,共5天。⑥中药低剂量组：以中药浓缩剂五苓痛风丸低浓度12g溶液灌胃,每天1次,共5天。,除空白组外其余5组均造模,注入尿酸钠结晶溶液,诱导急性关节模型,空白组注入相同体积的生理盐水。第5天灌胃后24h取材并处死大鼠2临床研究内容：由高尿酸血症而引发的急性痛风性关节炎是痛风的前驱症状。起病急骤,多首发于足拇趾的跖关节,其他受累部位依次为踝、跟、膝、腕、指、肘等关节。常有多种诱因：如饱餐、进食高嘌呤食物、饮酒、劳累、受冷、感染等。发作可数小时、数天或数周,缓解期可数月甚至终生。由于痛风反复发作,导致向慢性病程转化。其治疗方法,降低血尿酸,缓解急性期的症状、减少急性复发。西医的治疗以治标为主,虽消炎止痛消肿见效快,但副作用大。中医治疗痛风标本兼治为本,副作用少,中医治疗痛风已逐渐显著优势。3高尿酸血症诊断标准：据国内资料正常值男性血尿酸150-380μ mol/L(2.4-6.4mg /dl),女性绝经前尿酸为100-300μ mol/L (1.6-5.2mg/dl),而女性绝经后接近正常男性尿酸水平。故任何原因引起尿酸生成增加或排泄少,导致血尿酸浓度升高男性和绝经后女性的血尿酸浓度为大於380μ mol/L (6.4mg/dl)以上,女性绝经前大於300μ mol/L (5.2mg/dl)以上可诊断为高尿酸血症。4急性痛风性关节炎分类标准：根据1977年美国风湿病学会(ACR)订定的《急性痛风关节炎诊断参考标准。5慢性肾脏病(CKD)诊断标准：我国对慢性肾功能不全的分为5期：即1期正常(已有肾病)、2期代偿期、3期失代偿期、4期肾衰竭期、5期尿毒症期。6中医诊断标准：参照1994年国家中医药管理局所发布,中华人民共和国中医药行业标准,《中医病证诊断疗效标准》ZY/T001.1—94中医内科痛风病证诊断疗效标准。7临床实验伦理规范等规范标准。结果：1动物实验结果：(1)五苓痛风丸对急性痛风性关节炎大鼠模型的作用机理研究：首先造模,结果发现：中药高剂量组与扶他林组能够一定程度上降低关节功能障碍指数；中药组的关节炎症指数高于扶他林组,低于模型组,24h和72h效果较明显；24h和72h后,中药组的关节肿胀率低于扶他林组,也低于模型组。然后,通过观察关节滑膜组织病理形态学的改变,发现中药组能一定程度上减少炎性细胞浸润,吞噬细胞增生和组织紊乱等。最后,通过免疫组织化学和Elisa实验发现,中药组的NF K B p65、 VCAM1和IL-1β均发生不同程度的下调表达,且呈现剂量效应,即中药组剂量越高,则其效能越高。说明中药对急性痛风性关节炎具有一定治疗效果,且我们推测其是通过核转录因子NF κ B信号通路发挥作用。(2)五苓痛风丸对尿酸盐诱导的痛风性关节炎的细胞模型的作用机理研究：通过细胞实验：首先构建痛风性关节炎的细胞模型,通过qRT-PCR实验检测ICAM-I的表达,来摸索尿酸盐的造模浓度和造模时间,选择细胞状态最佳的24h为最佳时间,选择中药浓度1,000μM为最佳浓度(炎性因子大量产生时间为24h左右最佳)。其次,摸索中药的给药浓度,qRT-PCR实验检测ICAM-I的表达,发现随着浓度的增加,ICAM-I随之下降,具有剂量效应,故选择效果最好的高剂量组。随后,为了验证是否通过NF κB信号通路发挥作用,我们将NF κBp65进行siRNA干扰,下调其表达(通过qRT-PCR和WB实验筛选获得有效siRNA).最后,经WB和Elisa实验结果显示,NF K Bp65下调后, NF κ B p65、VCAM1和IL-1β表达均发生下调,且效果与中药组相差无几,由此推测中药确实是通过下调NF κ B的表达,进而影响VCAM1和IL-1β表达而发挥作用。2临床研究结果：(1)参照《临床疾病诊断依据治愈好转的标准》2002版中的有关内容,结合高尿酸血症临床实际,拟定疗效标准。显效数占40%；有效数占33.3%；无效数占26.7%；总有效率占73.3%。(2)治疗前后肾功能及血尿酸比较,经五苓痛风丸治疗后,治疗前血尿酸528.8±69.9,治疗后平均尿酸下降为435.6±78.0,且经过统计分析二者差异是有统计学意义(P0.05),说明五苓痛风丸对降尿酸明显有疗效。(3)至于肾小球滤过率(eGFR),治疗前平均eGFR为68.93±17.22,治疗后平均eGFR为77.09±20.75似乎表示治疗后能有改善,但经过统计检测后发现二者差异无统计学意义P0.05),此表明五苓痛风丸对肾功能无害。也可能对尿酸治疗并非通过改善肾功能为标的。结论：本论文中药浓缩剂-五苓痛风丸对治疗高尿酸血症及痛风关节炎,经动物实验、细胞实验、临床研究及统计分析结果：(1)五苓痛风丸高剂量组肿胀率低于造模组,表明治疗有效,同时五苓痛风丸低、中剂量与扶他林组造模组肿胀率差异均未显示统计意义,表明五苓痛风丸治疗效果与扶他林组相当。加大剂量、效果更优于造模组与扶他林组。(2)五苓痛风丸经实验,对动物具有一定抗炎作用,并对痛风性关节肿胀显著抑制效力。(3)对细胞实验,五苓痛风丸,能降低对大鼠痛风性关节炎之病变局部炎性白细胞、滑模浸润及增生。(4)根据实验说明：五苓痛风丸对尿酸盐诱导的痛风性关节炎,具有一定治疗效果,能够减轻炎性反应,由整个实验证明推测,是经过核因子转录因子NFκ Bp65信号通路发挥抑制作用。(5)本课题经过五苓痛风丸对急性痛风性关节炎影响实验,证明其具有抗炎作用,也探讨了其部分机理,因此其实验结果,足以作为临床提供了有力的理论基础。(6)中药五苓痛风丸,长远的看是标本兼治,药效持久性,副作用少,除治疗主症痛风外,对其伴随症比较全面性的改善。(7)临床研究结论：五苓痛风丸对痛风性关节炎有一定的临床疗效,其机制与降低血尿酸和抗炎相关。
【图文】：

尿酸,戊糖,脱氧核糖,重吸收

逦逦逦胃内胃Ｉ邋Ｉ核酸酶Ｉ逡逑酸炸用Ｉ邋Ｉ水解Ｉ逡逑逦逦邋大部分在＾膜细逡逑核巧酶逦胞＃被Ａ解。逡逑逦］邋ｒ逦逡逑？核逦糖—逦逦逡逑＾戊糖Ｉ邋ｆＫ邋Ｋ邋Ａ邋）邋Ｉ逦＿＾被肠黏膜吸收，，并参加体内戊糖代谢。逡逑逦邋Ｉ脱氧核糖Ｉ逡逑（邋Ｄ邋Ｎ邋Ａ邋）邋Ｉ邋￣逡逑碱基邋ｈ邋，逦邋＾逦＾逦＂邋Ｉ邋—＾邋酸逡逑—？喀巧逦Ｌ＿＾邋腺嘿吟—逦逦邋＿—逡逑１：尿酸重吸收逡逑

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【学位授予单位】：广州中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R285

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