层粘连蛋白/岩藻聚糖类基膜微环境的构建及微流控芯片内应用
发布时间：2020-12-08 17:43
血管内皮层具有天然抗凝血和快速内皮化作用。基膜处于内皮下层和平滑肌上层,完整基膜结构能够有效保护内皮层和抑制平滑肌增生,在血管植入材料表面进行生物化仿生基膜构建能有效地减少植入后的并发症。目前,采用具有细胞结合位点以及三位空间结构的天然生物大分子进行类基膜环境的仿生构建是材料表面生物化及再生医学发展的一个重要方向。因此,本文利用具有抗凝血性能及细胞生长调节作用的多功能蛋白及多糖分子仿生构建血管类基膜环境,并应用于微流控芯片研究其对细胞生长行为的影响。论文的主要内容如下：（1）利用层层自组装（LBL）方法将岩藻聚糖硫酸酯（F）、层黏连接蛋白（Ln）通过静电吸附固定于APTE硅烷化后的玻片表面,并研究了自组装薄膜的生物相容性。酸性橙实验、XPS结果显示硅烷化后获得了富含-NH2的表面,水接触角显示组装薄膜为亲水状态,表面岩藻聚糖含量分析以及QCM-D结果表明组装过程Ln、F增加的质量。与氨基化玻片表面相比,LBL薄膜随着组装层数的增加不仅抑制血小板粘附与激活的能力越强,其促进内皮、内皮祖细胞生长的能力都更好。（2）利用共混固定方法将岩藻聚糖硫酸酯、层黏连接蛋白固定于APTE硅烷化后的玻片表...
【文章来源】：西南交通大学四川省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：92 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－５层截连蛋白结构
２．?２．?２构建方法??研究利用层层自组装方法，将具有抗凝血功能的岩藻聚糖和基膜主要成分之一的??层點连蛋白进行细胞基底膜的构建。具体制备方法如图２－１所示。??Ｓｏｎｉｃａｔｅｄ?ｂｙ?Ｅｔｈａｎｏｌ?ａｎｄ?Ｄｅｉｏｎｉｚｅｄ?Ｗａｔｅｒ????????？??ｔ，?Ｇｌａｓｓ??Ｈ２Ｓ０４：Ｈ２０２＝７：３．?８０＇Ｃ，?ＩＨ??？?ｆ．??＜？‘??？ＯＨ?Ｈ?Ｇｌａｓｓ?．?Ｉ??３％ＡＰＴＥ，?５０＇Ｃ．?１２Ｈ?丨?Ｇｌａｓｓ?「Ｉ＂??Ｒｅｐｅａｔ??１?‘?Ｇｌａｓｓ?．?Ｉ??■??ｔＰＢＳｒｐＨ３），?ＬＮ?ｍｍ??ＥＤＣ／ＮＩＩＳ／ＭＥＳ??１－Ｌｎ￣－？‘Ｇｌａｓｓ?，?Ｉ??後?Ｍ?ＰＢＳｊｐＨＳ），?Ｆ??图２－１层层自组装Ｆ／Ｌｎ微环境的构建示意图??具体步驟如下：??（１）玻片的制备与清洗：利用玻璃刀将载玻片切割为１０＊１０ｍｍ尺寸样品（Ｇｌａｓｓ，??长征玻化
２ｐ峰位在原始玻片Ｇｌａｓｓ，以及Ｇ＠ＯＨ、Ｇ＠ＯＨ＠ＡＰＴＥ表面峰值都较高，但面组装Ｌｎ后，Ｇ＠ＯＨ＠Ａ＠Ｌｎ表面Ｓｉ２ｓ、Ｓｉ２ｐ峰位急剧降低，说明样品表面Ｌｎ薄膜降低了原始玻片的Ｓｉ２ｓ、Ｓｉ２ｐ峰。??水接触角结果及分析??材料表面水接触角测试结果如图２－６所示，与Ｇｌａｓｓ相比，硅焼化后Ｇ＠ＡＰ品的水接触角有一定升高，结果与图２－４的表述是一致的。由于干净的玻片是水的，硅焼化引入氨基基团，使得疏水性增加。层粘连蛋白和岩藻聚糖都是双分子物质，其分子组成中含有不同比例的亲疏水基团，且当材料表而吸附上不物质时都会引起材料表面水接触角的变化，所以吸附Ｌｎ和Ｆ后的表面水接触６５°Ｃ，处于亲水状态。随着组装层数的增加，表面固定的分子数量也越来越多，薄膜的粗糖度增大引起疏水性略有增加，当表面组装数达到一定后，表面亲达到稳定。但是Ｇ＠Ａ＠５－Ｆ样品的接触角大于６５°Ｃ，可能由于当吸附量达到后，改变材料表面的粗链度状态，从而改变材料表面的亲疏水状态。?????
【参考文献】：
期刊论文
[1]我国心血管疾病现状与展望[J]. 姚震,陈林. 海南医学. 2013(13)
[2]基于微流控芯片构建三维基质支架中的肿瘤细胞侵袭模型[J]. 宋振,蔡绍皙,陈斯佳,晏小清,孙炜,卢斯媛. 科学通报. 2012(23)
[3]Outline of the Report on Cardiovascular Disease in China,2010[J]. National Center for Cardiovascular Disease,China HU Sheng Shou 1,KONG Ling Zhi 2,GAO Run Lin 1,ZHU Man Lu 1,WANG Wen 1,WANG Yong Jun 3,WU Zhao Su 4,CHEN Wei Wei 1,LIU Ming Bo 1 1.National Center For Cardiovascular Diseases,Beijing 100037,China;2.Ministry of Health of the People’ Republic of China,Beijing 100044,China;3.Beijing Tiantan Hospital,Beijing 100050,China;4.Beijing Anzhen Hospital,Beijing 100029,China. Biomedical and Environmental Sciences. 2012(03)
[4]Study on Antithrombotic and Antiplatelet Activities of Low Molecular Weight Fucoidan from Laminaria japonica[J]. CHEN Anjin 1), 3), ZHANG Fang 3), SHI Jie 1), 3), and ZHAO Xue 2),* 1) School of Medicine and Pharmacy, Ocean University of China, Qingdao 266003, P. R. China 2) College of Food Science and Technology, Qingdao 266003, P. R. China 3) Qingdao Municipal hospital, No.1, Jiaozhou Road, Qingdao 266071, P. R. China. Journal of Ocean University of China. 2012(02)
[5]基于微流控芯片构建一种新的体外血管生成模型[J]. 戴小珍,蔡绍皙,叶群芳,蒋稼欢,晏小清,熊新,江奇峰,WANG Albert Chih-Lueh,谭毅. 科学通报. 2011(27)
[6]预防心血管病走路比服药更管用[J]. 卢文洁. 甘肃林业. 2011(03)
[7]抗凝血生物材料[J]. 何淑漫,周健. 化学进展. 2010(04)
[8]药物洗脱支架与晚期支架血栓形成[J]. 乔岩,马长生. 临床心血管病杂志. 2008(01)
[9]自由基氧化法制备海带岩藻聚糖硫酸酯的抗凝血活性[J]. 赵雪,傅海舰,薛长湖,苗本春,付雪艳. 中国水产科学. 2007(06)
[10]药物支架晚期血栓[J]. 刘长红,刘毅,赵树武. 心血管病学进展. 2007(03)
博士论文
[1]Ti表面固定层粘连蛋白/肝素/SDF-1α以构建抗凝及诱导内皮再生微环境的研究[D]. 刘涛.西南交通大学 2014
[2]不同分子质量海带岩藻聚糖硫酸酯抗血栓活性及机理研究[D]. 陈安进.中国海洋大学 2012
硕士论文
[1]微流控芯片的设计制备及用于内皮祖细胞生长行为的研究[D]. 朱晓华.西南交通大学 2014
[2]Ti表面构建肝素—纤连蛋白-VEGF生物功能层及抗凝/诱导内皮化评价[D]. 王雪.西南交通大学 2014
[3]玻璃表面修饰的基底材料对细胞粘附研究[D]. 相森.北京化工大学 2012
[4]载体表面化学组成对蛋白质吸附行为的影响[D]. 万容兵.浙江理工大学 2010
[5]钛氧薄膜材料表面层粘连蛋白与纤连蛋白联合固定以及内皮化研究[D]. 樊珊.西南交通大学 2008
[6]钛氧薄膜材料表面层粘连蛋白修饰以及内皮化研究[D]. 葛胜男.西南交通大学 2007
本文编号：2905434
【文章来源】：西南交通大学四川省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：92 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－５层截连蛋白结构
２．?２．?２构建方法??研究利用层层自组装方法，将具有抗凝血功能的岩藻聚糖和基膜主要成分之一的??层點连蛋白进行细胞基底膜的构建。具体制备方法如图２－１所示。??Ｓｏｎｉｃａｔｅｄ?ｂｙ?Ｅｔｈａｎｏｌ?ａｎｄ?Ｄｅｉｏｎｉｚｅｄ?Ｗａｔｅｒ????????？??ｔ，?Ｇｌａｓｓ??Ｈ２Ｓ０４：Ｈ２０２＝７：３．?８０＇Ｃ，?ＩＨ??？?ｆ．??＜？‘??？ＯＨ?Ｈ?Ｇｌａｓｓ?．?Ｉ??３％ＡＰＴＥ，?５０＇Ｃ．?１２Ｈ?丨?Ｇｌａｓｓ?「Ｉ＂??Ｒｅｐｅａｔ??１?‘?Ｇｌａｓｓ?．?Ｉ??■??ｔＰＢＳｒｐＨ３），?ＬＮ?ｍｍ??ＥＤＣ／ＮＩＩＳ／ＭＥＳ??１－Ｌｎ￣－？‘Ｇｌａｓｓ?，?Ｉ??後?Ｍ?ＰＢＳｊｐＨＳ），?Ｆ??图２－１层层自组装Ｆ／Ｌｎ微环境的构建示意图??具体步驟如下：??（１）玻片的制备与清洗：利用玻璃刀将载玻片切割为１０＊１０ｍｍ尺寸样品（Ｇｌａｓｓ，??长征玻化
２ｐ峰位在原始玻片Ｇｌａｓｓ，以及Ｇ＠ＯＨ、Ｇ＠ＯＨ＠ＡＰＴＥ表面峰值都较高，但面组装Ｌｎ后，Ｇ＠ＯＨ＠Ａ＠Ｌｎ表面Ｓｉ２ｓ、Ｓｉ２ｐ峰位急剧降低，说明样品表面Ｌｎ薄膜降低了原始玻片的Ｓｉ２ｓ、Ｓｉ２ｐ峰。??水接触角结果及分析??材料表面水接触角测试结果如图２－６所示，与Ｇｌａｓｓ相比，硅焼化后Ｇ＠ＡＰ品的水接触角有一定升高，结果与图２－４的表述是一致的。由于干净的玻片是水的，硅焼化引入氨基基团，使得疏水性增加。层粘连蛋白和岩藻聚糖都是双分子物质，其分子组成中含有不同比例的亲疏水基团，且当材料表而吸附上不物质时都会引起材料表面水接触角的变化，所以吸附Ｌｎ和Ｆ后的表面水接触６５°Ｃ，处于亲水状态。随着组装层数的增加，表面固定的分子数量也越来越多，薄膜的粗糖度增大引起疏水性略有增加，当表面组装数达到一定后，表面亲达到稳定。但是Ｇ＠Ａ＠５－Ｆ样品的接触角大于６５°Ｃ，可能由于当吸附量达到后，改变材料表面的粗链度状态，从而改变材料表面的亲疏水状态。?????
【参考文献】：
期刊论文
[1]我国心血管疾病现状与展望[J]. 姚震,陈林. 海南医学. 2013(13)
[2]基于微流控芯片构建三维基质支架中的肿瘤细胞侵袭模型[J]. 宋振,蔡绍皙,陈斯佳,晏小清,孙炜,卢斯媛. 科学通报. 2012(23)
[3]Outline of the Report on Cardiovascular Disease in China,2010[J]. National Center for Cardiovascular Disease,China HU Sheng Shou 1,KONG Ling Zhi 2,GAO Run Lin 1,ZHU Man Lu 1,WANG Wen 1,WANG Yong Jun 3,WU Zhao Su 4,CHEN Wei Wei 1,LIU Ming Bo 1 1.National Center For Cardiovascular Diseases,Beijing 100037,China;2.Ministry of Health of the People’ Republic of China,Beijing 100044,China;3.Beijing Tiantan Hospital,Beijing 100050,China;4.Beijing Anzhen Hospital,Beijing 100029,China. Biomedical and Environmental Sciences. 2012(03)
[4]Study on Antithrombotic and Antiplatelet Activities of Low Molecular Weight Fucoidan from Laminaria japonica[J]. CHEN Anjin 1), 3), ZHANG Fang 3), SHI Jie 1), 3), and ZHAO Xue 2),* 1) School of Medicine and Pharmacy, Ocean University of China, Qingdao 266003, P. R. China 2) College of Food Science and Technology, Qingdao 266003, P. R. China 3) Qingdao Municipal hospital, No.1, Jiaozhou Road, Qingdao 266071, P. R. China. Journal of Ocean University of China. 2012(02)
[5]基于微流控芯片构建一种新的体外血管生成模型[J]. 戴小珍,蔡绍皙,叶群芳,蒋稼欢,晏小清,熊新,江奇峰,WANG Albert Chih-Lueh,谭毅. 科学通报. 2011(27)
[6]预防心血管病走路比服药更管用[J]. 卢文洁. 甘肃林业. 2011(03)
[7]抗凝血生物材料[J]. 何淑漫,周健. 化学进展. 2010(04)
[8]药物洗脱支架与晚期支架血栓形成[J]. 乔岩,马长生. 临床心血管病杂志. 2008(01)
[9]自由基氧化法制备海带岩藻聚糖硫酸酯的抗凝血活性[J]. 赵雪,傅海舰,薛长湖,苗本春,付雪艳. 中国水产科学. 2007(06)
[10]药物支架晚期血栓[J]. 刘长红,刘毅,赵树武. 心血管病学进展. 2007(03)
博士论文
[1]Ti表面固定层粘连蛋白/肝素/SDF-1α以构建抗凝及诱导内皮再生微环境的研究[D]. 刘涛.西南交通大学 2014
[2]不同分子质量海带岩藻聚糖硫酸酯抗血栓活性及机理研究[D]. 陈安进.中国海洋大学 2012
硕士论文
[1]微流控芯片的设计制备及用于内皮祖细胞生长行为的研究[D]. 朱晓华.西南交通大学 2014
[2]Ti表面构建肝素—纤连蛋白-VEGF生物功能层及抗凝/诱导内皮化评价[D]. 王雪.西南交通大学 2014
[3]玻璃表面修饰的基底材料对细胞粘附研究[D]. 相森.北京化工大学 2012
[4]载体表面化学组成对蛋白质吸附行为的影响[D]. 万容兵.浙江理工大学 2010
[5]钛氧薄膜材料表面层粘连蛋白与纤连蛋白联合固定以及内皮化研究[D]. 樊珊.西南交通大学 2008
[6]钛氧薄膜材料表面层粘连蛋白修饰以及内皮化研究[D]. 葛胜男.西南交通大学 2007
本文编号：2905434
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