新型磁性纳米材料的制备及其分离纯化菠萝蛋白酶的研究

发布时间：2021-01-14 00:32

　　菠萝蛋白酶,具有酯键和酰胺键的特性,其水解能力强,生物活性高,被普遍应用于食品、药品、饲料等多个方面。但是,由于植物细胞结构复杂,含有许多复杂的有机化合物,如酚类、色素、多糖等,对高纯度和高活性菠萝蛋白酶的提取造成影响,因此,研发一种新型的菠萝蛋白酶分离纯化的方法具有重要意义。本论文主要制备了三种磁性纳米材料,通过透射电镜（TEM）、热重分析（TGA）、X-射线衍射（XRD）、磁滞回线（VSM）和傅里叶变换红外（FT-IR）对材料的形貌和性能进行表征,并将其用于分离纯化菠萝蛋白酶,具体内容如下:（1）设计合成了温敏性磁性微球Fe₃O₄@P（GMA-co-NIPAM）/IDA/Ni²⁺,对其形貌及结构进行表征。优化了该材料与菠萝蛋白酶之间的吸附条件如温度、pH、时间等参数,得到该磁性微球对菠萝蛋白酶的最佳吸附量为117 mg/g。将达到吸附平衡的Fe₃O₄@P（GMA-co-NIPAM）/IDA/Ni²⁺与菠萝蛋白酶混合液在70℃条件下变性10 min,室温... 

【文章来源】：江苏大学江苏省

【文章页数】：97 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

IgG检测的竞争性免疫测定的示意图

(a) (b)图 1.2 (a) 石墨烯；(b)氧化石墨烯Figure 1.2 (a) Graphene; (b) Graphene oxide1.2.2.3 磁性氧化石墨烯功能复合材料在分离富集方面的应用Hao Jing 等[71]制备了一种磁性氧化石墨烯复合材料（Go-Co-NH-Fe3O4）用于吸附胰蛋白酶，该材料可通过氢键相互作用连接胰蛋白酶分子，得出最终的吸附量为 0.275 mg/mg。Xiniang Hu 等[72]优化了磺化 GO@Fe3O4复合材料与 Cu2+之间的吸附条件，发现吸附量在 Cu2+初始浓度为 73.71 mg/L，pH 等于 4.68，温度为 50℃的条件下达到最优，约为 62.73 mg/g。吕生华等[73]利用反相乳液交联法设计合成了一种壳聚糖与 GO@Fe3O4的复合材料（MCGO），用于吸附水溶液中的甲基橙。发现，吸附量在 GO 含量为 5 wt%，MCGO 用量为 60 mg，吸附时间为 2 h，pH 等于 5 时，吸附量达到最优，约为 164.79 mg/g。

江苏大学硕士学位论文在当地超市购买新鲜的菲律宾进口菠萝，清洗干净后，剥皮，置于冰箱中预冷 12 h，将菠萝皮与磷酸盐缓冲液按照 1:1 的比例进行榨汁，然后保持 10 min后，过滤，将滤液倒入 10 mL 离心管中，在 6000 r/min 离心机中离心 20 min，温度设置为 4℃，上清液放入-18℃冰箱中保存。2.3.6.2 磁性材料 Fe3O4@P(GMA-co-NIPAM)/IDA/Ni2+的应用如图 2.1 所示，量取 0.2 mg Fe3O4@P(GMA-co-NIPAM)/IDA/Ni2+分散于 300μL 菠萝皮粗提液中，在 30℃恒温震荡箱中孵育 30 min 后，借助磁性将吸附剂材料与粗提液分离，使用 0.2 M 的磷酸盐缓冲液（pH=4, 1 M NaCl）对材料进行洗脱，在 40℃恒温震荡箱中震荡 30 min 后磁分离产物，保留上清液分析凝胶电泳。


本文编号：2975844