聚乙烯亚胺和透明质酸的DNA纳米载体的制备与性能研究

发布时间：2021-12-09 03:22

　　基因治疗是通过导入正常基因来纠正缺陷或异常基因,而基因治疗过程所需的理想载体须具有安全性和高效性,但现有载体很难平衡安全性与高效性。支链分子量为25kDa的聚乙烯亚胺因其“质子海绵效应”、高转染效率以及携带遗传物质容量大使其成为最有潜力的应用最广泛的阳离子聚合物,但聚乙烯亚胺具有很高的毒性。本文以聚乙烯亚胺（PEI）和靶向细胞中CD44受体的透明质酸（HA）为基础材料构建的DNA纳米载体以期望实现高效、低毒、靶向性。将聚乙烯亚胺（PEI）和透明质酸（HA）分别与能表达绿色荧光蛋白的pDNA和分子量152kb的病毒型双链DNA通过静电自组装制备PEI/pDNA（DNA）/HA三元复合物纳米载体,通过DLS和透射电镜对制备的纳米载体进行粒径、电位和形貌的表征,凝胶电泳实验表征纳米载体对DNA的装载作用,进行转染实验观察有无绿色荧光蛋白的表达。制备PEI/pDNA/HA三元复合物纳米载体的最优条件为将负电荷组分溶液加入pH为7.4正电荷组分溶液中,PEI的浓度为0.5 mg/mL,HA的浓度为0.2 mg/mL。制备的纳米载体粒径分布在100²00 nm,TEM观察到直... 

【文章来源】：湖北工业大学湖北省

【文章页数】：83 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 引言
    1.1 基因治疗
        1.1.1 基因治疗概述
        1.1.2 蛋白表达概述
    1.2 载体进入细胞的过程
    1.3 阳离子聚合物概述
        1.3.1 阳离子聚合物的分类
        1.3.2 阳离子聚合物的性质
        1.3.3 阳离子聚合物的生物活性
        1.3.4 阳离子聚合物的不同结构形态
    1.4 DNA纳米载体发展及现状
    1.5 本论文选题依据、内容、意义及方法
        1.5.1 PEI/pDNA/HA三元复合物纳米载体的制备
        1.5.2 PEI/DNA/HA三元复合物纳米载体的制备
        1.5.3 PEI/pDNA/HA-mPEG三元复合物纳米载体的制备
        1.5.4 PEI/pDNA/HA-PEG-PTMC三元复合物纳米载体的制备
第2章 PEI/pDNA/HA三元复合物纳米载体的制备与表征
    2.1 前言
    2.2 实验部分
        2.2.1 主要试剂
        2.2.2 仪器
        2.2.3 PEI/pDNA/HA纳米载体的制备
        2.2.4 电泳实验
        2.2.5 体外基因表达实验
        2.2.6 PEI-Rh标记
    2.3 结果与讨论
        2.3.1 不同的影响因素对纳米载体粒径电位以及稳定性的影响
        2.3.2 通过红外光谱对聚乙烯亚胺和透明质酸进行表征
        2.3.3 电泳实验表征
        2.3.4 PEI-Rh标记紫外检测
        2.3.5 PEI-Rh荧光表征
        2.3.6 体外转染部分结果
    2.4 本章小结
第3章 PEI/DNA/HA三元复合物纳米载体的制备与表征
    3.1 前言
    3.2 实验部分
        3.2.1 主要试剂
        3.2.2 仪器
        3.2.3 PEI/DNA/HA纳米载体的制备
    3.3 结果与讨论
        3.3.1 不同配方下的纳米载体的制备及表征
        3.3.2 电泳表征
    3.4 本章小结
第4章 PEI/pDNA/HA-mPEG三元复合物纳米载体的制备与表征
    4.1 前言
    4.2 实验部分
        4.2.1 主要试剂
        4.2.2 仪器
        4.2.3 PEI/pDNA/HA-mPEG纳米载体的制备
        4.2.4 电泳实验
    4.3 结果与讨论
        4.3.1 HA-mPEG的红外光谱表征
        4.3.2 PEI/pDNA/HA-mPEG纳米载体的DLS和电镜表征
        4.3.3 PEI/pDNA/HA-mPEG纳米载体的凝胶电泳表征
    4.4 本章小结
第5章 PEI/pDNA/HA-PEG-PTMC三元复合物纳米载体的制备与表征
    5.1 前言
    5.2 实验部分
        5.2.1 主要试剂
        5.2.2 仪器
        5.2.3 制备PEI/pDNA/HA-PEG-PTMC纳米复合物
        5.2.4 电泳实验
        5.2.5 BSA吸附实验
    5.3 结果与讨论
        5.3.1 合成HA-PEG-PTMC的红外表征
        5.3.2 三元复合物PEI/pDNA/HA-PEG-PTMC的DLS与电镜表征
        5.3.3 PEI/pDNA/HA-PEG-PTMC纳米载体的凝胶电泳表征
        5.3.4 PEI/pDNA/HA-PEG-PTMC纳米载体BSA吸附表征
    5.4 本章小结
第6章 总结与展望
参考文献
致谢
附录 发表论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]阳离子纳米聚合物的合成、表征及其抗菌性研究[J]. 肖先森,刘鹤筹,温青,杨乐敏,王正辉.  功能材料. 2015(22)
[2]基因治疗载体的研究进展[J]. 王保琳.  淮海医药. 2011(02)

博士论文
[1]纳米载体输送核酸药物分子用于癌症治疗的研究[D]. 刘熙秋.中国科学技术大学 2012



本文编号：3529817