nHAP/PLA中空多孔微球的制备及成骨细胞的响应

发布时间：2023-03-05 20:42

　　骨组织工程技术是目前公认的最有希望修复骨缺陷的治疗方法之一。生物反应器是获取大量骨组织种子的重要途径。微球具有较大的比表面积,短时间细胞可以在微球表面大量增殖。并且培养过程中添加微载体就可以完成细胞的传代,避免了传统培养方法中使用胰酶消化对细胞的损害。但是目前商业化的微载体降解能力差,价格昂贵。因此,研制优质微载体生物材料仍是当前研究热点。本研究通过使用致孔剂联合乳化挥发法制备出聚乳酸(Polylactide, PLA)和纳米羟基磷灰石/聚乳酸(Nano-Hydroxyapatiten/ Polylactide, nHAP/PLA)中空多孔微球,考察不同的微球的物化性质,并将成骨细胞(Osteoblasts, OBs)接种在微球上,考察微球的生物相容性,以期制备出最适合成骨细胞生长的微球。以二氯甲烷(CH2C12)为溶剂,明胶为分散剂,NH4HCO3为致孔剂制备中空多孔的PLA微球。微球的粒径大小和粒径分布受聚乳酸浓度、分散剂浓度、复乳搅拌速度和致孔剂浓度等因素影响。采用相同工艺制备了nHAP/PLA微球,通过比较不同nHAP加入量微球的表面形貌、吸水率、接触角和悬浮能力,筛选出最适合...

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
1 文献综述
    1.1 骨组织工程种子细胞的研究进展
    1.2 生物反应器
    1.3 微载体制备研究现状
        1.3.1 微载体的性能要求
        1.3.2 常用微载体
        1.3.3 多孔微载体的制备方法
        1.3.4 PLA微球
        1.3.5 纳米羟基磷灰石及其复合材料
    1.4 选题依据及研究内容
2 PLA微球的制备工艺
    2.1 实验仪器与材料
        2.1.1 实验药品
        2.1.2 实验仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 聚乳酸空心多孔微球的制备
        2.2.2 单因素分析制备聚乳酸微球
        2.2.3 微球形态观察
        2.2.4 微球支架的粒径分布
    2.3 实验结果
        2.3.1 中空多孔微球形成机理
        2.3.2 聚乳酸制备各因素的影响
    2.4 本章小结
3. 纳米羟基磷灰石/聚乳酸空性多孔微球的制备
    3.1 实验仪器与材料
        3.1.1 实验药品
        3.1.2 实验仪器
    3.2 实验方法
        3.2.1 纳米羟基磷灰石/聚乳酸空心多孔微球的制备
        3.2.2 微球形态观察
        3.2.3 HA/PLA接触角测试
        3.2.4 BSA蛋白吸附实验
        3.2.5 微球沉降性标准
        3.2.6 试验设计
    3.3 实验结果
        3.3.1 纳米羟基磷灰石形态及粒径
        3.3.2 微球形态观察
        3.3.3 红外检测
        3.3.4 正交实验结果及分析
    3.4 小结
4 纳米羟基磷灰石/聚乳酸空心多孔微球细胞复合物的构建
    4.1 实验材料
        4.1.1 实验仪器与设备
        4.1.2 药品与试剂
    4.2 成骨细胞的原代培养及传代培养
        4.2.1 成骨细胞的原代培养
        4.2.2 成骨细胞的传代培养
        4.2.3 成骨细胞的纯化
        4.2.4 成骨细胞的形态学检测
        4.2.5 成骨细胞体外矿化能力检测
    4.3 微球的成骨细胞反应检测
        4.3.1 纳米羟基磷灰石/聚乳酸微球接种成骨细胞
        4.3.2 微球上成骨细胞活性及形态检测
    4.4 成骨细胞培养及鉴定实验结果
        4.4.1 原代及传代培养结果
        4.4.2 成骨细胞的生物学性能检测
    4.5 细胞实验结果
        4.5.1 成骨细胞黏附率
        4.5.2 CCK8细胞活性检测
        4.5.3 微球上细胞生长情况
        4.5.4 成骨细胞功能检测
    4.6 小结
结论
参考文献
攻读硕士学位期间发表学术论文情况



本文编号：3756884