细胞贴附脱附性能可控温敏性细胞培养微球的研制
发布时间：2023-05-06 02:37
传统的细胞收获法是采用胰蛋白酶消化,然而胰蛋白酶的消化不可避免地降解细胞膜蛋白和沉积的细胞外基质(ECM),导致细胞活力降低甚至某些功能的丧失,影响治疗级细胞产品的质量。聚(N-异丙基丙烯酰胺)(PNIPAM)是一种可用于细胞培养与温控脱附的温敏性智能材料,然而,PNIPAM温敏性材料存在细胞脱附速率慢且细胞成片脱落的问题,影响其在细胞培养中应用。为此,本文通过不同基材的微球,制备了接枝PNIPAM温敏性微球,并通过控制温度实现了细胞在微球上的贴附、扩增和分散脱附。本文首先以Cytodex 3和SiO2微球为基材,分别采用“Grafting to”法和“Grafting from”法成功制备了 PNIPAM-Cytodex 3微球和PNIPAM-SiO2微球,并以Hela细胞为对象,考察了该微球对细胞贴附、生长以及脱附的影响,结果发现,这两种微球均在一定程度上可支持Hela细胞的贴附与生长,但都未能实现细胞的温控脱附。其次,以聚苯乙烯微球为基材,通过“Grafting from”法制备了不同PNIPAM接枝量的聚苯乙烯微球。利用Hela细胞评估不同PNIPAM接枝量的聚苯乙烯微球对细胞...
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 前言
1.1 智能响应材料
1.2 温度响应材料
1.2.1 天然温敏聚合物
1.2.2 醚类温敏聚合物
1.2.3 酰胺类温敏聚合物
1.3 温敏性微球的制备
1.3.1 温敏性微球的基材
1.3.2 温敏性微球制备方法
1.4 本研究的内容和意义
第2章 材料与方法
2.1 实验仪器设备
2.2 实验材料与试剂
2.2.1 培养基与血清
2.2.2 细胞培养器材
2.2.3 微球
2.2.4 化学试剂
2.2.5 其他试剂
2.3 实验方法
2.3.1 PNIPAM-Cytodex 3的制备
2.3.2 PNIPAM-SiO2的制备
2.3.3 PNIPAM-Polystyrene的制备
2.3.4 傅里叶变换红外光谱分析
2.3.5 核磁共振氢谱分析
2.3.6 微球表面元素含量分析
2.3.7 Cytodex 3微球的预处理
2.3.8 细胞培养孔板的预处理
2.3.9 SiO2微球和聚苯乙烯微球的灭菌
2.3.10 PNIPAM-Cytodex 3上Hela细胞的培养与收获
2.3.11 PNIPAM-SiO2和PNIPAM-Polystyrene上Hela细胞的培养与收获
2.3.12 PNIPAM-Polystyrene上MSCs细胞的培养与收获
2.3.13 温敏收获的细胞的再增殖能力检测
2.3.14 MSCs细胞分化能力检测
2.3.15 细胞计数
2.3.16 细胞死活染色
2.3.17 统计学分析
第3章 PNIPAM修饰的Cytodex 3和SiO2微球制备
3.1 PNIPAM修饰的Cytodex 3微球制备与表征
3.1.1 PNIPAM-Cytodex 3微球的制备
3.1.2 产物的表征
3.2 PNIPAM-Cytodex 3微球应用于Hela细胞的体外培养
3.2.1 Hela细胞在PNIPAM-Cytodex 3微球上的贴附
3.2.2 Hela细胞在PNIPAM-Cytodex 3微球上的扩增
3.2.3 Hela细胞在PNIPAM-Cytodex 3微球上的降温脱附
3.3 PNIPAM修饰的SiO2微球制备与表征
3.3.1 PNIPAM-SiO2微球的制备
3.3.2 产物的表征
3.4 PNIPAM-SiO2应用于Hela细胞的体外培养
3.4.1 Hela细胞在PNIPAM-SiO2上的贴附
3.4.2 Hela细胞在PNIPAM-SiO2上的扩增
3.4.3 Hela细胞在PNIPAM-SiO2上的降温脱附
3.5 本章小结
第4章 PNIPAM修饰的聚苯乙烯微球的制备
4.1 PNIPAM修饰的聚苯乙烯微球制备与表征
4.1.1 PNIPAM修饰的聚苯乙烯微球的制备
4.1.2 PNIPAM修饰的聚苯乙烯微球的表征
4.2 PNIPAM-Polystyrene应用于Hela细胞的体外培养
4.2.1 Hela细胞在PNIPAM-Polystyrene上的贴附
4.2.2 Hela细胞在PNIPAM-Polystyrene上的扩增
4.2.3 Hela细胞在PNIPAM-Polystyrene上的降温脱附
4.2.4 Hela细胞的再增殖能力
4.3 PNIPAM-Polystyrene应用于MSCs细胞的体外培养
4.3.1 MSCs细胞在PNIPAM-Polystyrene上的贴附
4.3.2 MSCs细胞在PNIPAM-Polystyrene上的扩增
4.3.3 MSCs细胞在PNIPAM-Polystyrene上的降温脱附
4.3.4 MSCs细胞的再增殖能力
4.3.5 MSCs细胞的分化能力
4.4 本章小结
第5章 全文总结与展望
5.1 全文总结
5.2 展望
参考文献
致谢
附录
本文编号：3808855
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 前言
1.1 智能响应材料
1.2 温度响应材料
1.2.1 天然温敏聚合物
1.2.2 醚类温敏聚合物
1.2.3 酰胺类温敏聚合物
1.3 温敏性微球的制备
1.3.1 温敏性微球的基材
1.3.2 温敏性微球制备方法
1.4 本研究的内容和意义
第2章 材料与方法
2.1 实验仪器设备
2.2 实验材料与试剂
2.2.1 培养基与血清
2.2.2 细胞培养器材
2.2.3 微球
2.2.4 化学试剂
2.2.5 其他试剂
2.3 实验方法
2.3.1 PNIPAM-Cytodex 3的制备
2.3.2 PNIPAM-SiO2的制备
2.3.3 PNIPAM-Polystyrene的制备
2.3.4 傅里叶变换红外光谱分析
2.3.5 核磁共振氢谱分析
2.3.6 微球表面元素含量分析
2.3.7 Cytodex 3微球的预处理
2.3.8 细胞培养孔板的预处理
2.3.9 SiO2微球和聚苯乙烯微球的灭菌
2.3.10 PNIPAM-Cytodex 3上Hela细胞的培养与收获
2.3.11 PNIPAM-SiO2和PNIPAM-Polystyrene上Hela细胞的培养与收获
2.3.12 PNIPAM-Polystyrene上MSCs细胞的培养与收获
2.3.13 温敏收获的细胞的再增殖能力检测
2.3.14 MSCs细胞分化能力检测
2.3.15 细胞计数
2.3.16 细胞死活染色
2.3.17 统计学分析
第3章 PNIPAM修饰的Cytodex 3和SiO2微球制备
3.1 PNIPAM修饰的Cytodex 3微球制备与表征
3.1.1 PNIPAM-Cytodex 3微球的制备
3.1.2 产物的表征
3.2 PNIPAM-Cytodex 3微球应用于Hela细胞的体外培养
3.2.1 Hela细胞在PNIPAM-Cytodex 3微球上的贴附
3.2.2 Hela细胞在PNIPAM-Cytodex 3微球上的扩增
3.2.3 Hela细胞在PNIPAM-Cytodex 3微球上的降温脱附
3.3 PNIPAM修饰的SiO2微球制备与表征
3.3.1 PNIPAM-SiO2微球的制备
3.3.2 产物的表征
3.4 PNIPAM-SiO2应用于Hela细胞的体外培养
3.4.1 Hela细胞在PNIPAM-SiO2上的贴附
3.4.2 Hela细胞在PNIPAM-SiO2上的扩增
3.4.3 Hela细胞在PNIPAM-SiO2上的降温脱附
3.5 本章小结
第4章 PNIPAM修饰的聚苯乙烯微球的制备
4.1 PNIPAM修饰的聚苯乙烯微球制备与表征
4.1.1 PNIPAM修饰的聚苯乙烯微球的制备
4.1.2 PNIPAM修饰的聚苯乙烯微球的表征
4.2 PNIPAM-Polystyrene应用于Hela细胞的体外培养
4.2.1 Hela细胞在PNIPAM-Polystyrene上的贴附
4.2.2 Hela细胞在PNIPAM-Polystyrene上的扩增
4.2.3 Hela细胞在PNIPAM-Polystyrene上的降温脱附
4.2.4 Hela细胞的再增殖能力
4.3 PNIPAM-Polystyrene应用于MSCs细胞的体外培养
4.3.1 MSCs细胞在PNIPAM-Polystyrene上的贴附
4.3.2 MSCs细胞在PNIPAM-Polystyrene上的扩增
4.3.3 MSCs细胞在PNIPAM-Polystyrene上的降温脱附
4.3.4 MSCs细胞的再增殖能力
4.3.5 MSCs细胞的分化能力
4.4 本章小结
第5章 全文总结与展望
5.1 全文总结
5.2 展望
参考文献
致谢
附录
本文编号：3808855
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