建立甲胎蛋白的纳米抗体-RT-PCR超灵敏分析方法

发布时间：2023-08-06 07:48

　　在骆驼科(Camelid)动物的血清中存在一种天然缺失轻链的单域重链抗体(variable domain of heavy chain of heavy-chain antibody,VHH)。VHH仅由重链抗体可变区(Variable region)组成的基因工程抗体,由于分子量小,也称为也称为纳米抗体。与普通抗体及重组单链抗体(single chain fragment variable,scFv)相比,VHH具有分子小、水溶性高、稳定性强、易于表达等优点,因此具有广阔的应用前景。甲胎蛋白分子量69 KDa,成人血浆中含量低于30 ng/m L。当肝细胞发生癌变时,AFP在血清中的含量会明显升高,甲胎蛋白就成了诊断原发性肝癌的一个特异性临床指标,临床检测阈值为400 ng/mL。本研究运用纳米抗体,建立了基于双纳米抗体的夹心免疫PCR检测AFP,该方法灵敏度高、线性范围广。主要研究内容如下:1、AFP羊驼免疫库的构建。AFP免疫羊驼,采取四免血液,分离白细胞,提取RNA。以RNA为模板,反转录构建cDNA文库。通过巢式PCR,扩增目的VHH基因。利用限制性内切酶EcolⅠ和SfiⅠ...

【文章页数】：103 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
缩略语表（Abbreviations）
第1章 综述
    1.1 前言
    1.2 甲胎蛋白研究进展
    1.3 纳米抗体
    1.4 纳米抗体的应用
    1.5 噬菌体展示技术
    1.6 荧光免疫PCR技术
    1.7 外源基因原核表达
    1.8 研究内容及意义
第2章 羊驼AFP免疫纳米抗体库的构建
    2.1 材料、仪器和试剂
    2.2 方法与步骤
    2.3 结果与分析
    2.4 小结
第3章 AFP纳米抗体的淘选与鉴定
    3.1 材料、仪器和试剂
    3.2 方法与步骤
    3.3 试验结果
    3.4 小结
第4章 AFP纳米抗体的表达与鉴定
    4.0 技术路线
    4.1 实验设备以及试剂
    4.2 试验方法
    4.3 试验结果
    4.4 小结
第5章 基于纳米抗体建立AFP荧光免疫PCR检测方法
    5.0 技术路线
    5.1 材料、仪器以及试剂
    5.2 实验步骤
    5.3 实验结果
    5.4 小结
第6章 讨论
    6.1 库容量主要的影响因素
    6.2 淘选策略讨论
    6.3 噬菌体序列分析
    6.4 纳米抗体的原核表达
    6.5 免疫PCR方法的建立
第7章 结论与展望
    7.1 结论
    7.2 展望
致谢
参考文献
攻读硕士期间研究成果



本文编号：3839349