荧光能量共振转移法研究牛血清蛋白部分肽段和水相金纳米颗粒的相互作用
本文关键词：荧光能量共振转移法研究牛血清蛋白部分肽段和水相金纳米颗粒的相互作用
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【摘要】：最新研究发现牛血清白蛋白(Bovine Serum Albumin, BSA)可以被两亲性聚合物(Amphiphilic Polymer, AP)包裹的金纳米颗粒即水相金纳米颗粒(Aqueous Phase Gold Nanoparticles, AP-AuNPs)高亲和吸附,依次经蛋白酶K酶解、十二烷基硫酸钠(Sodium Dodecyl Sulfate, SDS)洗脱、聚丙烯酰胺凝胶纯化回收、质谱鉴定得知,吸附区域为BSA中的三段肽链LGEYGFQNALIVRY、 KDAFLGSFLYEYSR和KVPQVSTPTLVEVSRS.为了进一步研究BSA与AP-AuNPs的作用机理,本研究选取了上述肽段中含有荧光氨基酸残基的两段,LGEYGFQNALIVRY (P1)和KDAFLGSFLYEYSR (P2),以及BSA中距离吸附区最远的且含有荧光氨基酸残基的一段肽链FDEHVKLVNELTEF (P3),先经过体外固相合成这三段肽链,然后分别与AP-AuNPs吸附,利用最大吸光光谱红移法和琼脂糖鉴定法对二者的相互作用进行定性研究,再利用荧光能量共振转移(Fluorescence Resonance Energy Transfer, FRET)法和热力学方程分别计算出AP-AuNPs与三段肽链之间的结合常数和吉布斯自由能。通过比较结合常数和吉布斯自由能的大小发现,AP-AuNPs可吸附P1和P2,而不吸附P3或吸附力极小。进而得知,BSA与AP-AuNPs吸附区域的特异性,AP-AuNPs会选择性吸附BSA的部分肽段,与肽链的序列信息有关,具有一定的识别能力。这一结果使我们对BSA和AP-AuNPs的作用机制有了更深层次的理解,这对于纳米颗粒对蛋白质的生物标记、重金属污染检测以及具有识别能力的多肽链的开发等热门课题的研究具有重要的指导意义。
【关键词】：金纳米颗粒 多肽 荧光能量共振转移 特异性结合
【学位授予单位】：内蒙古农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：Q51;TB383.1
【目录】：
- 摘要3-4
- abstract4-9
- 1 引言9-14
- 1.1 概述9-10
- 1.2 国内外研究现状10-11
- 1.3 研究背景和意义11-12
- 1.4 研究内容12-13
- 1.5 创新点13-14
- 2 实验材料与方法14-21
- 2.1 试剂14
- 2.2 实验仪器14
- 2.3 实验方法14-21
- 2.3.1 油相金纳米颗粒的合成14-15
- 2.3.2 两亲性聚合物的制备15
- 2.3.3 油相金纳米颗粒的包裹15-16
- 2.3.4 水相金纳米颗粒的纯化16
- 2.3.5 固相法合成多肽16-17
- 2.3.6 多肽的纯化17
- 2.3.7 多肽的冻干17
- 2.3.8 溶液的配制17
- 2.3.9 多肽与金纳米颗粒作用机制的研究17-21
- 3 实验结果及分析21-32
- 3.1 水相金纳米颗粒的表征21
- 3.2 多肽和水相金纳米颗粒的表征21-22
- 3.3 水相金纳米颗粒与牛血清蛋白吸附的梯度试验22-23
- 3.4 水相金纳米颗粒与多肽的荧光淬灭试验23-30
- 3.4.1 多肽P_1与水相金纳米颗粒的相互作用24-26
- 3.4.2 多肽P_2与水相金纳米颗粒的相互作用26-28
- 3.4.3 多肽P_3与水相金纳米颗粒的相互作用28-30
- 3.5 水相金纳米颗粒与多肽的荧光能量共振转移结果30-32
- 4 结论32-33
- 5 展望33-34
- 致谢34-35
- 参考文献35-38
- 附录38-39
- 作者简介39
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