基于微流控芯片技术筛选尿嘧啶核苷营养缺陷型米曲霉诱变菌株
发布时间：2021-07-24 19:28
米曲霉作为中国传统酿造的重要菌株之一,生长快速且蛋白外分泌能力强,所以常用作外源蛋白表达的优良宿主菌。而作为宿主菌的一个筛选标记来说,营养缺陷型标记基因更加高效和安全。而微流控技术可以快速产生一定尺寸和大小均一的液滴,可以很好地应用于细胞分析方面。大大减少了试剂的消耗和提高了筛选速度,我们利用微流控系统对pyrG缺陷株进行筛选,主要研究内容如下:我们搭建了微流控系统平台,选择流动聚焦型芯片产生液滴。研究不同的非离子表面活性剂对液滴稳定性的影响。用显微镜观察液滴粒径随时间的变化,通过液滴的液滴个数、归一化平均粒径、液滴粒径标准差、液滴粒径归一化标准差随时间的变化情况来判断液滴的稳定。当HLB值约为5.5时,表面活性剂体积分数为5%,液滴的稳定性在短时间较好。长时间相比,我们选择了 Abil EM90组成的油相能使液滴在10 h内保持稳定,所以选用Abil EM90作为非离子表面活性剂。接着研究油水两相流量（Q）比对液滴粒径和分布关系。当Q油/Q水比例越大时,液滴在流道中的间距越来越大,并且液滴从无间隔排列直到呈现了一条直线状分布。,随着Q油/Q水的增大,液滴粒径越来越小。当固定Q油/Q水...
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２．２注射泵生成液滴系统实物图??Ｆｉｇｕｒｅ?２．２?Ｔｈｅ?ｐｈｙｓｉｃａｌ?ｍａｐ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｄｒｏｐｌｅｔ?ｓｙｓｔｅｍ?ｇｅｎｅｒａｔｅｄ?ｂｙ?ｔｈｅ?ｓｙｒｉｎｇｅ?ｐｕｍｐ??
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?第二章液滴微流控体系的建立???滴均一性良好。??ａｊ??Ｉ．??０．０?■?？?Ｉ?１?Ｉ?１??１?■?｜?？?１??５０?６０?７０?ＳＯ?９０?１００?１１０?１２０?１３０??ｂａｒ＝２００ｐｍ?粒径（Ｍｒａ）??Ａ?Ｂ??图２．４液滴图像和液滴粒径概率分布图（ｌ〇ｘｌ〇）??Ｆｉｇｕｒｅ?２．４?Ｄｒｏｐｌｅｔ?ｉｍａｇｅ?ａｎｄ?ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｙ?ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ?ｏｆ?ｄｒｏｐｌｅｔ?ｓｉｚｅ?（ｌ〇ｘｌ〇）??图２．４?Ａ为液滴图片，Ｂ为液滴粒径概率分布图。??不同的流量产生液滴在芯片流道中的分布情况如图２．５所示。从图２．ＳＡ－Ｄ??来看，四种流量下液滴在流道中的分布无较大波动。在同一条件下，产生的液滴??粒径大小基本一样，并且，四种流量下的液滴之间的间距基本一致，无融合现象，??说明该系统生成的液滴具有很好的均一性和稳定性。综上，从而说明该微流控系??统在液滴生成中稳定性较好。??１４??
【参考文献】：
期刊论文
[1]以吡啶硫胺素抗性基因为选择标记的红曲菌原生质体转化研究[J]. 崔华,李燕萍. 安徽农业科学. 2012(23)
[2]基于基因组改组的米曲霉沪酿3.042多亲株PEG介导融合育种[J]. 潘力,梁燕嫦,苗小康,胡杰. 中国酿造. 2008(23)
[3]米曲霉孢子原生质体复合诱变及高活力蛋白酶菌株选育[J]. 胡杰,潘力,罗立新,王斌,卢锦桃. 食品工业科技. 2007(05)
[4]复合涂层的不粘和耐磨性能研究[J]. 贺敬宏,耿刚强. 西安科技大学学报. 2005(03)
[5]聚四氟乙烯用作耐高压润滑材料[J]. 塑料工业. 1974(01)
博士论文
[1]橙色红曲菌中基于pyrG标记的同源转化系统的建立[D]. 王伯华.南昌大学 2010
硕士论文
[1]乙烯-四氟乙烯共聚物微孔膜制备及性能研究[D]. 黄衡.天津工业大学 2019
[2]液滴微流控用于单细胞包裹和数字化PCR[D]. 李越.中国科学技术大学 2016
[3]低能法制备油包水纳米乳液及其性能研究[D]. 潘红.山东大学 2014
[4]高产酸性蛋白酶的酱油发酵米曲霉的选育[D]. 司晓光.天津科技大学 2014
[5]酱油工业菌株米曲霉3.951自克隆系统的构建[D]. 季艳伟.南昌大学 2012
[6]微流体系统中的玻璃微管道工艺及其流动特性研究[D]. 黄孙峰.南京理工大学 2004
本文编号：3301283
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２．２注射泵生成液滴系统实物图??Ｆｉｇｕｒｅ?２．２?Ｔｈｅ?ｐｈｙｓｉｃａｌ?ｍａｐ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｄｒｏｐｌｅｔ?ｓｙｓｔｅｍ?ｇｅｎｅｒａｔｅｄ?ｂｙ?ｔｈｅ?ｓｙｒｉｎｇｅ?ｐｕｍｐ??
?第二章液滴微流控体系的建立???２．３．２流动聚焦型芯片结构??（３）??Ａ?Ｂ??图２．３芯片实物图和结构图??Ｆｉｇｕｒｅ?２．３?Ｃｈｉｐ?ｐｈｙｓｉｃａｌ?ｄｉａｇｒａｍ?ａｎｄ?ｓｔｍｃｔｕｒｅ?ｄｉａｇｒａｍ??图２．３八为卩０１＼４８芯片实物图，８为卩０１＾５芯片结构图（１）为芯片出口，（２）为水相??进口，Ｃ３）为油相进口。??我们使用的芯片流道深度为１〇〇?（？〇？，主流道宽度均为３００?ｐｍ，油相和水相??交界处的宽度比主流道更小，力丨〇〇?Ｒｍ。在单细胞包埋时，更加有利于细胞依??次通过流道，更容易的生成单细胞分散液滴。芯片附着在玻璃上，材质为ＰＤＭＳ，??是一种表面疏水的材料，适合形成油包水液滴。??２．３．３系统稳定性检测??如图２．４所示，该微流控系统生成的液滴图像和液滴粒径概率分布图。配制??邛如８０?２．２２§和吐温８０?０．２８§作为油相，设置程序〇油＝０．２２?１１１１７１１，〇水＝０．０２６??ｍＬ／ｈ。从２．４?Ａ看，生成的液滴均一性较好。从液滴粒径概率分布图（图２．４?Ｂ）??来看，液滴的平均粒径为９６．６９叫，生成的液滴直径集中在９〇叫１－１００叫１，粒??径分布范围在８５?＾１１１－１０５?（ｉｍ。液滴粒社的波动范围较小，因此该系统生成的液??１３??
?第二章液滴微流控体系的建立???滴均一性良好。??ａｊ??Ｉ．??０．０?■?？?Ｉ?１?Ｉ?１??１?■?｜?？?１??５０?６０?７０?ＳＯ?９０?１００?１１０?１２０?１３０??ｂａｒ＝２００ｐｍ?粒径（Ｍｒａ）??Ａ?Ｂ??图２．４液滴图像和液滴粒径概率分布图（ｌ〇ｘｌ〇）??Ｆｉｇｕｒｅ?２．４?Ｄｒｏｐｌｅｔ?ｉｍａｇｅ?ａｎｄ?ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｙ?ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ?ｏｆ?ｄｒｏｐｌｅｔ?ｓｉｚｅ?（ｌ〇ｘｌ〇）??图２．４?Ａ为液滴图片，Ｂ为液滴粒径概率分布图。??不同的流量产生液滴在芯片流道中的分布情况如图２．５所示。从图２．ＳＡ－Ｄ??来看，四种流量下液滴在流道中的分布无较大波动。在同一条件下，产生的液滴??粒径大小基本一样，并且，四种流量下的液滴之间的间距基本一致，无融合现象，??说明该系统生成的液滴具有很好的均一性和稳定性。综上，从而说明该微流控系??统在液滴生成中稳定性较好。??１４??
【参考文献】：
期刊论文
[1]以吡啶硫胺素抗性基因为选择标记的红曲菌原生质体转化研究[J]. 崔华,李燕萍. 安徽农业科学. 2012(23)
[2]基于基因组改组的米曲霉沪酿3.042多亲株PEG介导融合育种[J]. 潘力,梁燕嫦,苗小康,胡杰. 中国酿造. 2008(23)
[3]米曲霉孢子原生质体复合诱变及高活力蛋白酶菌株选育[J]. 胡杰,潘力,罗立新,王斌,卢锦桃. 食品工业科技. 2007(05)
[4]复合涂层的不粘和耐磨性能研究[J]. 贺敬宏,耿刚强. 西安科技大学学报. 2005(03)
[5]聚四氟乙烯用作耐高压润滑材料[J]. 塑料工业. 1974(01)
博士论文
[1]橙色红曲菌中基于pyrG标记的同源转化系统的建立[D]. 王伯华.南昌大学 2010
硕士论文
[1]乙烯-四氟乙烯共聚物微孔膜制备及性能研究[D]. 黄衡.天津工业大学 2019
[2]液滴微流控用于单细胞包裹和数字化PCR[D]. 李越.中国科学技术大学 2016
[3]低能法制备油包水纳米乳液及其性能研究[D]. 潘红.山东大学 2014
[4]高产酸性蛋白酶的酱油发酵米曲霉的选育[D]. 司晓光.天津科技大学 2014
[5]酱油工业菌株米曲霉3.951自克隆系统的构建[D]. 季艳伟.南昌大学 2012
[6]微流体系统中的玻璃微管道工艺及其流动特性研究[D]. 黄孙峰.南京理工大学 2004
本文编号：3301283
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