几种赤潮藻抗体的制备及酶联免疫检测方法的建立和应用

发布时间：2020-05-18 07:59

【摘要】：本研究选取我国近海常见的十九种赤潮藻为研究对象,通过免疫家兔制备了它们的多克隆抗体。对这些抗体进行效价测定和特异性鉴定后,选取了特异性好的几种分别建立了相应海藻的间接竞争型酶联免疫检测方法,并在模拟天然海水样品的检测中取得了比较理想的结果。通过用旋链角毛藻细胞免疫小鼠、产蛋鸡和家兔,结果发现三种动物均产生了抗旋链角毛藻的多克隆抗体,不同的免疫程序对抗体的产生和抗体的特异性影响不大。其中兔抗体制备的时间较短,效价高,且抗体的总量大,因此在十几种赤潮藻的多克隆抗体制备过程中,采用家兔作为接受免疫的对象。对制备的十几种赤潮藻的多克隆抗体分析后发现,所有抗体均表现高亲和力,效价最低的为6000,最高的达到69000;多数抗体特异性不好,与其他海藻显示一定的交叉反应,但有几种海藻的抗血清与其他海藻交叉反应很小或者没有;通过适当的吸附封闭法处理多克隆抗体,可以有效降低某些多克隆抗体与其他海藻的交叉反应。本研究选取特异性较好、具有高效价的抗柔弱角毛藻抗血清、抗赤潮异弯藻抗血清、抗海洋原甲藻抗血清和抗红色裸甲藻抗血清,分别建立了相应海藻的竞争型酶联免疫检测方法。抗柔弱角毛藻抗血清对角毛藻属旋链角毛藻、柔弱角毛藻、纤细角毛藻和微型角毛藻均可以很好的识别,具有一定的属特异性,最低检测数目达到51个细胞左右。其他三种抗血清均显示种特异性,在竞争ELISA试验中,最低检测细胞数目在几十到几百个之间,其中赤潮异弯藻和海洋原甲藻的最低检测数目分别达到了77个和55个细胞左右。利用这些抗血清和ELISA方法,对几份模拟海水样品中的藻细胞进行了定量检测,和光镜直接计数的结果比较后发现,两者基本一致。此外,还对间接ELISA在浮游微藻检测中的应用作了初步探讨。
【学位授予单位】：中国海洋大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：X55

【相似文献】