赤潮毒素的毛细管电泳—酶联免疫分析方法的研究

发布时间：2020-05-30 20:05

【摘要】：本论文研究了利用辣根过氧化物酶(HRP)催化邻氨基酚(OAP)与H2O2的反应,将毛细管电泳与酶联免疫分析相结合,对两种赤潮毒素(神经性贝毒,NSP和西加鱼毒素,CFP)进行了分别研究。在此基础上,通过引入金纳米粒子(AuNPs)作为标记物,实现了对四种贝类毒素(麻痹性贝毒(PSP)、腹泻性贝毒(DSP)、记忆缺失性贝毒(ASP)以及神经性贝毒(NSP))的同时分离和检测。全文共分为七章: 第一章,概述了毛细管电泳的基本理论,介绍了酶联免疫分析的研究进展以及赤潮毒素的研究现状。第二章,介绍了电化学检测电极的改进方法以及聚乙烯醇和柠檬酸钠混合制作涂层毛细管的技术,并研究了Pt电极的污染情况。第三章,研究了毛细管电泳HRP—H2O2—OAP酶联免疫分析电化学检测平台的建立,考察了包括运行缓冲溶液浓度和pH值、分离电压、检测电位、进样条件在内的各个实验条件对HRP检测的影响,确定了最佳检测条件。在最佳检测条件下,HRP的线性范围为2.3×10~(-12)-3.5×10-10 mol/L,检测限为1.09×10~(-12)mol/L,质量检测限可以达到zmol水平。第四章,研究了使用HRP—H2O2—OAP体系的毛细管电泳—酶联免疫分析新体系测定NSP的新方法。通过酶标抗原(Ag*)与抗体(Ab)的特异性反应,实现了对Ag*以及Ab-Ag*复合物的检测;在此基础上采用竞争免疫反应模式,实现了对实际扇贝样品中NSP的定性和定量检测。此方法对NSP测定的线性范围为1.0-50.0 ng/mL,检测限为0.1 ng/mL,比常规酶联免疫法(ELISA)低4倍。第五章,研究了基于胶体金放大技术毛细管电泳—酶联免疫分析测定CFP及鱼类样品的新方法。利用AuNPs作为固相载体,将酶(HRP)和抗体(Ab)同时固定在其表面,得到了酶标抗体(Ab*),增加酶的固定量,提高检测灵敏度。通过抗原(Ag)与Ab*的特异性反应,实现了对Ab*以及Ag-Ab*复合物的检测;在此基础上采用非竞争免疫反应模式,实现了对实际鱼类样品中CFP的定性和定量检测。此方法对CFP测定的线性范围为1.0-50.0 pg/mL,检测限为0.3 pg/mL。第六章,研究了基于纳米金技术的毛细管电泳-酶联免疫同时分离分析四种贝类毒素的新方法,通过引入AuNPs作为标记物,改变了原组分的迁移速率,使得原本无法完全分离的四种贝类毒素能够很好的分离开来;再通过贝类样品中的DSP、PSP、NSP毒素与酶标抗原Ag*竞争有限量的抗体,ASP毒素和相应Ab*反应,实现了对实际样品中四种毒素的检测。结论部分,对全文内容进行了总结。
【图文】：

涂层管,裸管,剖面对比,毛细管

剖面对比图：1，裸管；2，自制涂层管；3，进口涂管涂层前具有相同的截面尺寸，50 μm ID, 375 μm Oparison of capillary cross-section: 1, bare capillary; 2, h; 3, import coated capillary. All of the three capillaries horiginal size of 50 mm i.d., 375 mm o.d.使用效果法制作的涂层管分别安装在分析装置上，在相间 30 s，结果见图 2-2。

涂层管,裸管,运行效果,酸化

将用不同方法制作的涂层管分别安装在分析装置上，，在相同条件下分析游离的 HRP，进样时间 30 s，结果见图 2-2。图2-2 毛细管涂层前后运行效果对比：1. 裸管；2. 普通涂层管；3. 酸化涂层管。运行条件：分离毛细管50 μm i.d × 375 μm o.d × 40 cm；反应毛细管长4 cm；甘汞参比电极；运行缓冲溶液含Tris 5 mmol L 1, H2O25 mmol/L, L-苏氨酸100 mmol L 1, HCl调制 pH 4.0；底物缓冲液含邻苯二胺20 mmol L 1, Tris 20 mmol L 1, HCl调制 pH 4.0；高压25 kV，检测 0.6V；进样30 s；底物缓冲池高15 cm。Fig. 2-2. Electropherograms of free HRP with: 1, bare capillary; 2, polyvinyl alcoholcoatedcapillary; 3, acidized poly(vinyl alcohol) coated capillary.13
【学位授予单位】：青岛科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：X55;X830

【参考文献】