含氮化合物联合胁迫下对球形棕囊藻抑藻机制的初探

发布时间：2020-08-26 09:11

【摘要】：我国棕囊藻赤潮的频发,会生成有害泡沫物质,消耗水中溶解氧,释放藻毒素,严重破坏海洋生态系统,危害人类健康。课题组前期已从珠海发生棕囊藻赤潮水体中分离得到一株能够抑制球形棕囊藻生长的芽孢杆菌B1,已鉴定出分泌的活性物质为咪唑丙烯酸、N-乙酰组胺、L-组氨酸。本论文在此基础上,进一步对这些纯抑藻物质在单一和联合胁迫下,对球形棕囊藻的抑藻效应、藻细胞的抗氧化系统及抑藻过程中细胞形貌和内部结构变化进行研究,并对球形棕囊藻抑藻前后藻细胞的溶血毒素活性、藻毒素组分的变化进行了测定。主要研究结果如下:(1)以96 h EC_(50)为指标,三种化合物的抑藻效应强弱的顺序为:咪唑丙烯酸(8μg/mL)N乙酰组胺(16μg/mL)L-组氨酸(23μg/mL)。以AI值为判断依据,二元混合物咪唑丙烯酸+N-乙酰组胺对球形棕囊藻的具体联合作用方式为协同作用,而咪唑丙烯酸+L-组氨酸,N-乙酰组胺+L-组氨酸表现为拮抗作用。(2)对抗氧化系统研究表明,二元混合物N-乙酰组胺与+咪唑丙烯酸更有利于提高藻细胞的MDA含量、SOD和CAT活性水平,说明其藻细胞膜脂过氧化,膜系统和抗氧化系统被破坏。(3)FESEM和TEM观察结果表明含氮化合物会对藻细胞形貌和内部结构产生影响,而不同含氮化合物作用于藻细胞的位点有所区别。N-乙酰组胺主要是通过影响细胞膜渗透性造成质壁分离,而咪唑丙烯酸直接破坏藻细胞内部的叶绿体和细胞核。联合处理进一步证明了N-乙酰组胺与咪唑丙烯酸对球形棕囊藻的抑制存在协同作用。(4)对抑藻过程中球形棕囊藻毒素溶血活性变化研究表明:含氮化合物投加浓度为EC_(50)(单一)和1:1 EC_(50)(联合)时,抑藻至第5 d时,咪唑丙烯酸、N-乙酰组胺单一处理组及其联合处理组的溶血百分数相比对照组下降了37.6%,52.5%和67.5%。表明咪唑丙烯酸+N-乙酰组胺对棕囊藻细胞胞内毒素溶血活性影响较大。(5)通过HPLC和GC-MS对含氮化合物抑藻后棕囊藻的毒素检测,HPLC检测结果表明对照组和处理组藻毒素组分不变(均为8个),但N-乙酰组胺和尿刊酸联合胁迫下则可以同时抑制组分4和组分1的合成,GC-MS检测结果则表明N-乙酰组胺+咪唑丙烯酸可抑制C_(17)H_(32)O_2和C_(19)H_(34)O_2两种组分的合成。表明咪唑丙烯酸+N-乙酰组胺能使棕囊藻合成脂肪酸的能力下降,从而降低毒性。
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：X55
【图文】：

装置图,人工海水,装置图,培养基配方

图 2.1 制备人工海水的装置图Fig 2.1 The experiment setup of synthetic seawater表 2.1 改良的 f/2 藻种培养基配方Table 2.1 Modified f/2 algae culture medium formula 组分原液浓度培养基中浓度NO375.0 g·L-1dH2O 8.83 x 10-4MSiO3· 9H2O 30.0 g·L-1dH2O 1.07 x 10-4MH2PO4· H2O 5.0 g·L-1dH2O 3.63 x 10-5MEDTA · 2H2O - 1 x 10-5Ml3· 6H2O - 1 x 10-5MSO4· 5H2O 9.8 g·L-1dH2O 4 x 10-8MSO4· 7H2O 22.0 g·L-1dH2O 8 x 10-8MCl2· 6H2O 10.0 g·L-1dH2O 5 x 10-8M

结构图,含氮化合物,结构图,工作液

暨南大学硕士学位论文海水养殖专用盐（广东省盐业集团多品种盐有限公司）；丙酮（分析纯，天津市天新精细化工有限公司）L-组氨酸（上海化工新兴化工试剂研究所）咪唑丙烯酸 Sigma-aldrichN-乙酰组胺 Sigma-aldrich（2）实验试剂L-组氨酸母液和工作液咪唑丙烯酸母液和工作液N-乙酰组胺母液和工作液

抑藻效应,球形棕囊藻,含氮化合物,组胺

暨南大学硕士学位论文的顺序为：咪唑丙烯酸（8 μg/mL）> N 乙酰组胺（16 3 μg/mL）。Chen[40]等在验证抑藻过程中，这三种含氮化序为：咪唑丙烯酸（2 μg/mL）> N 乙酰组胺（4 μg/mmL）。因此选择咪唑丙烯酸和 N 乙酰组胺进行后续研究一抑藻效应强弱顺序与本课题组文献报道相应的敏感浓丙烯酸比 N-乙酰组胺和 L-组氨酸具有更强的溶藻效应，囊藻吸收咪唑丙烯酸比 N 乙酰组胺和 L-组氨酸更快。Z L-赖氨酸对铜绿微囊藻具有更强的抑藻效应是由于铜绿 L-赖氨酸更快。

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