大马蹄螺（Trochus niloticus）对海水酸化和热应激/磺胺甲恶唑复合暴露的生理响应
发布时间：2021-06-10 18:19
近年来,化石能源燃烧、森林砍伐等工农业活动向大气中排放了大量的CO2,由此产生的温室效应导致了表层海水温度的持续升高;同时,海洋吸收了约1/3人类活动排放的CO2,也导致了海水p H值的持续降低,这种现象被称为海洋酸化,其被认为是继“温室效应”之后由CO2过量排放而引起的又一全球性环境问题。此外,人类活动还向海洋中排放了大量的污染物,主要包括营养盐类、重金属、石油及石油类产品、抗生素、持久类有机污染物和塑料制品等,导致了近海环境的严重破坏,从而对海洋生物的生存和繁衍以及海洋生态系统的结构和功能构成了严重威胁。我国南海海域拥有丰富的珊瑚礁资源,具有重要的生态服务价值及经济价值;目前,我国的南海珊瑚礁生态系统正遭受着气候变化和人类活动双重因素的威胁,西沙群岛珊瑚礁生态系统中的活珊瑚比例已不足10%。大马蹄螺（Trochus niloticus）作为南海珊瑚礁生态系统中重要的植食性腹足类动物,其对大型底栖藻类的啃食作用可有效控制珊瑚礁生态系统中藻类的生物量,从而保证珊瑚在与藻类的生态位竞争中处于优势地位。本研究旨在评估南海珊瑚...
【文章来源】：中国科学院大学(中国科学院烟台海岸带研究所)山东省
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
技术路线
第2章大马蹄螺对海水酸化和热应激复合暴露的生理响应13图2.1大马蹄螺血淋巴细胞计数的FITC直方图注：A-阴性对照组；B-处理组Figure2.1FITCcountshistogramplotyieldedbyflowcytometricanalysisofthetotalhaemocytescountsinT.niloticusNote：A-Negativecontrol;B-Treatment.2.2.4.4血淋巴细胞呼吸爆发使用血淋巴细胞内的ROS产量来表示细胞内的呼吸爆发作用。DCFH-DA可以自由进入细胞，并且在细胞内经过酯酶水解转变为不带荧光的DCFH，DCFH可以被细胞内ROS氧化成为带有绿色荧光的物质DCF，其荧光强度可由流式细胞仪的FL1通道（绿色荧光）检测，测定方法简述如下：取500μLPBS缓冲液重悬的血淋巴细胞，加入5μLDCFH-DA母液使其在工作液中的最终浓度为0.01mmol/L，18℃避光孵育1小时后上流式细胞仪检测。根据未加入探针的阴性处理样品结果，确定绿色荧光强度的阳性范围，统计各样品阳性范围中的细胞内DCF绿色荧光强度的几何平均值，即为细胞内ROS含量（图2.2）。
大马蹄螺（Trochusniloticus）对海水酸化和热应激/磺胺甲恶唑复合暴露的生理响应14图2.2大马蹄螺血淋巴细胞呼吸爆发的FITC直方图注：A-阴性对照组；B-处理组。Figure2.2FITCcountshistogramplotyieldedbyflowcytometricanalysisyieldedbyflowcytometricanalysisofROSproductioninT.niloticusNote：A-Negativecontrol;B-Treatment.2.2.4.5血淋巴细胞凋亡率使用AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡试剂盒（碧云天），测定血淋巴细胞凋亡率。Annexin是一类广泛分布于真核细胞细胞浆内的钙离子依赖的磷脂结合蛋白，其参与细胞内的信号转导，可以选择性的结合细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸，而在细胞凋亡早期，各类细胞均会将磷脂酰丝氨酸翻到外侧。使用绿色荧光的荧光探针FITC标记的Annexin可识别这一重要特征；此外，碘化丙啶（PI）可以对坏死或细胞膜完整性受到破坏的细胞进行染色，即可区分样品中处于凋亡早期状态的细胞和坏死的细胞，具体测定方法简述如下：使用500μL缓冲液重悬血淋巴细胞，加入5μLAnnexinV-FITC和10μLPI染料，18℃下避光孵育20分钟后使用流式细胞仪检测，使用FL-1通道（绿色荧光）检测AnnexinV-FITC，FL-2通道（红色荧光）检测PI。在实验过程中，设置未添加染料的阴性对照组、仅加入FITC和PI的单染组以确定散点图中十字门位置（图2.3）。各样品中的血淋巴细胞凋亡率结果采用FITC阳性和PI阴性（Q3）细胞数目占总细胞数目的百分比来表示。
【参考文献】：
期刊论文
[1]珊瑚礁生态系统修复研究进展[J]. 龙丽娟,杨芳芳,韦章良. 热带海洋学报. 2019(06)
[2]山东省主要河流中抗生素污染组成及空间分布特征[J]. 张慧,郭文建,朱晨,李红莉,王桂勋,岳太星,丁波涛. 中国环境监测. 2019(01)
[3]磺胺类抗生素对水环境的污染及生态毒理效应[J]. 李秀文,何益得,张巍,徐会,黄其林,周子凡,许灵均. 环境科学与技术. 2018(S1)
[4]大型海藻在珊瑚礁退化过程中的作用[J]. 廖芝衡,余克服,王英辉. 生态学报. 2016(21)
[5]海洋暖化对海洋生物的影响[J]. 姚翠鸾,George N.Somero. 科学通报. 2015(09)
[6]中国主要水域抗生素污染现状及其生态环境效应研究进展[J]. 章强,辛琦,朱静敏,程金平. 环境化学. 2014(07)
[7]南海珊瑚礁经济价值评估[J]. 王丽荣,余克服,赵焕庭,张乔民. 热带地理. 2014(01)
[8]As（Ⅲ）暴露对紫贻贝抗氧化酶活性和脂质过氧化的影响[J]. 李巧梅,王清,于倩,吴惠丰,由丽萍,赵建民. 海洋通报. 2013(04)
[9]Effects of ocean acidification on the metabolic rates of three species of bivalve from southern coast of China[J]. 刘文广,何毛贤. Chinese Journal of Oceanology and Limnology. 2012(02)
[10]软体动物免疫因子研究进展[J]. 许宝红,刘巧林,钟蕾. 当代水产. 2010(09)
硕士论文
[1]海洋酸化及变暖对刺参主要生理生态过程和免疫的影响[D]. 卢羽洁.大连海洋大学 2017
本文编号：3222886
【文章来源】：中国科学院大学(中国科学院烟台海岸带研究所)山东省
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
技术路线
第2章大马蹄螺对海水酸化和热应激复合暴露的生理响应13图2.1大马蹄螺血淋巴细胞计数的FITC直方图注：A-阴性对照组；B-处理组Figure2.1FITCcountshistogramplotyieldedbyflowcytometricanalysisofthetotalhaemocytescountsinT.niloticusNote：A-Negativecontrol;B-Treatment.2.2.4.4血淋巴细胞呼吸爆发使用血淋巴细胞内的ROS产量来表示细胞内的呼吸爆发作用。DCFH-DA可以自由进入细胞，并且在细胞内经过酯酶水解转变为不带荧光的DCFH，DCFH可以被细胞内ROS氧化成为带有绿色荧光的物质DCF，其荧光强度可由流式细胞仪的FL1通道（绿色荧光）检测，测定方法简述如下：取500μLPBS缓冲液重悬的血淋巴细胞，加入5μLDCFH-DA母液使其在工作液中的最终浓度为0.01mmol/L，18℃避光孵育1小时后上流式细胞仪检测。根据未加入探针的阴性处理样品结果，确定绿色荧光强度的阳性范围，统计各样品阳性范围中的细胞内DCF绿色荧光强度的几何平均值，即为细胞内ROS含量（图2.2）。
大马蹄螺（Trochusniloticus）对海水酸化和热应激/磺胺甲恶唑复合暴露的生理响应14图2.2大马蹄螺血淋巴细胞呼吸爆发的FITC直方图注：A-阴性对照组；B-处理组。Figure2.2FITCcountshistogramplotyieldedbyflowcytometricanalysisyieldedbyflowcytometricanalysisofROSproductioninT.niloticusNote：A-Negativecontrol;B-Treatment.2.2.4.5血淋巴细胞凋亡率使用AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡试剂盒（碧云天），测定血淋巴细胞凋亡率。Annexin是一类广泛分布于真核细胞细胞浆内的钙离子依赖的磷脂结合蛋白，其参与细胞内的信号转导，可以选择性的结合细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸，而在细胞凋亡早期，各类细胞均会将磷脂酰丝氨酸翻到外侧。使用绿色荧光的荧光探针FITC标记的Annexin可识别这一重要特征；此外，碘化丙啶（PI）可以对坏死或细胞膜完整性受到破坏的细胞进行染色，即可区分样品中处于凋亡早期状态的细胞和坏死的细胞，具体测定方法简述如下：使用500μL缓冲液重悬血淋巴细胞，加入5μLAnnexinV-FITC和10μLPI染料，18℃下避光孵育20分钟后使用流式细胞仪检测，使用FL-1通道（绿色荧光）检测AnnexinV-FITC，FL-2通道（红色荧光）检测PI。在实验过程中，设置未添加染料的阴性对照组、仅加入FITC和PI的单染组以确定散点图中十字门位置（图2.3）。各样品中的血淋巴细胞凋亡率结果采用FITC阳性和PI阴性（Q3）细胞数目占总细胞数目的百分比来表示。
【参考文献】：
期刊论文
[1]珊瑚礁生态系统修复研究进展[J]. 龙丽娟,杨芳芳,韦章良. 热带海洋学报. 2019(06)
[2]山东省主要河流中抗生素污染组成及空间分布特征[J]. 张慧,郭文建,朱晨,李红莉,王桂勋,岳太星,丁波涛. 中国环境监测. 2019(01)
[3]磺胺类抗生素对水环境的污染及生态毒理效应[J]. 李秀文,何益得,张巍,徐会,黄其林,周子凡,许灵均. 环境科学与技术. 2018(S1)
[4]大型海藻在珊瑚礁退化过程中的作用[J]. 廖芝衡,余克服,王英辉. 生态学报. 2016(21)
[5]海洋暖化对海洋生物的影响[J]. 姚翠鸾,George N.Somero. 科学通报. 2015(09)
[6]中国主要水域抗生素污染现状及其生态环境效应研究进展[J]. 章强,辛琦,朱静敏,程金平. 环境化学. 2014(07)
[7]南海珊瑚礁经济价值评估[J]. 王丽荣,余克服,赵焕庭,张乔民. 热带地理. 2014(01)
[8]As（Ⅲ）暴露对紫贻贝抗氧化酶活性和脂质过氧化的影响[J]. 李巧梅,王清,于倩,吴惠丰,由丽萍,赵建民. 海洋通报. 2013(04)
[9]Effects of ocean acidification on the metabolic rates of three species of bivalve from southern coast of China[J]. 刘文广,何毛贤. Chinese Journal of Oceanology and Limnology. 2012(02)
[10]软体动物免疫因子研究进展[J]. 许宝红,刘巧林,钟蕾. 当代水产. 2010(09)
硕士论文
[1]海洋酸化及变暖对刺参主要生理生态过程和免疫的影响[D]. 卢羽洁.大连海洋大学 2017
本文编号：3222886
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/haiyang/3222886.html
最近更新
教材专著
