线粒体荧光标记的单颗粒水平高通量评估方法

发布时间：2017-10-15 20:41

  本文关键词：线粒体荧光标记的单颗粒水平高通量评估方法

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【摘要】：线粒体是真核细胞能量代谢和信号转导的调控中枢,虽然各种灵敏、特异的线粒体荧光标记技术已经被广泛应用于线粒体研究,但仍缺乏单线粒体水平的荧光染色性能评估方法。基于超高灵敏流式检测技术(High sensitivity flow cytometry,HSFCM)能对单个线粒体进行高灵敏、高通量、多参数定量分析的独特优势,本研究发展了一种单线粒体水平的荧光标记高通量评估方法。将携带靶向线粒体绿色荧光蛋白基因的p Ac GFP1-Mito质粒转染至人宫颈癌He La细胞中,用G418筛选出稳定转染细胞,分别从瞬时转染和稳定转染的细胞中提取线粒体。此外,从未转染质粒的正常He La细胞中提取线粒体,分别进行Mito Tracker Green标记以及SYTO 62线粒体DNA染色,应用实验室自行研制的超高灵敏流式检测装置在单线粒体水平对这4种线粒体标记方法的荧光亮度、标记效率和稳定性进行评估。实验结果表明,稳定转染细胞中单个线粒体的绿色荧光蛋白(GFP)荧光亮度为瞬时转染的17.7倍,比Mito Tracker Green标记的线粒体亮度高约两个数量级,且标记稳定性好。本研究为线粒体标记方法的选择提供了一种先进的分析方法。
【作者单位】： 厦门大学化学化工学院化学生物学系谱学分析与仪器教育部重点实验室化学生物学福建省重点实验室;
【关键词】： 线粒体 超高灵敏流式检测技术 瞬时转染 稳定转染 染料标记
【基金】：国家自然科学基金项目(Nos.91313302,90913015,21225523)资助~~
【分类号】：Q244;O657.3
【正文快照】： 1引言线粒体不仅是细胞的能量工厂[1],而且还是细胞内多种信号转导的调控中枢[2],如自噬、细胞凋亡、固有免疫等。许多人类疾病均与线粒体功能异常密切相关,包括神经退行性疾病、心肌病、癌症等[3]。因此,线粒体的结构与功能研究对于疾病诊治以及基础科学研究具有重要意义[4],

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本文编号：1038627