毛细管电泳法评价细胞和小分子的亲和相互作用

发布时间：2017-10-19 16:46

  本文关键词：毛细管电泳法评价细胞和小分子的亲和相互作用

  更多相关文章： 亲和相互作用 ACE 血小板 巨噬细胞 小分子化合物

【摘要】：毛细管电泳(CE)在评价物质间的亲和相互作用方面已有广泛的应用。主要电泳模式包括亲和毛细管电泳法(ACE)、部分填充亲和毛细管电泳法(PFACE)及前沿分析毛细管电泳法(FACE)等,研究对象主要包括核酸、蛋白质及多糖等生物大分子与药物小分子的相互作用。细胞作为基本生命单元,具有特殊的结构及功能,在药物吸收、分布及代谢方面发挥着重要作用。因此,研究细胞与小分子的亲和相互作用具有重要意义。本文优化建立几种CE方法用于研究细胞与小分子的相互作用,包括中药延胡索提取物的在线抗血小板聚集活性评价,具有抗血小板活性的酚酸类小分子化合物与血小板的相互作用,以及具有抗炎活性的苷类小分子化合物与巨噬细胞的相互作用。本论文主要包含五个部分(章节):第一部分为绪论部分,综述了研究亲和作用的意义、对象及方法,其中亲和毛细管电泳广泛用于物质间结合常数的测定,并已发展有多种亲和电泳模式用于评价不同体系。对血小板及巨噬细胞的生理、病理作用亦进行了简要的概述。第二部分建立了一种在线测定血小板聚集率的CE新方法并用于评价药物的抗血小板聚集活性。在阐明CE测定血小板聚集原理的基础上,推导出CE测定药物抗血小板聚集活性的计算公式。分别用CE及比浊法测定了中药延胡索提取物的抗血小板聚集活性,比较两种方法在样品消耗、测定结果及测定原理方面的区别。第三部建立了血小板功能化的OT-ACEC方法用于评价血小板与小分子化合物的亲和相互作用,成功评价丹酚酸B等小分子化合物与血小板的亲和相互作用。同时用比浊法测定了这些小分子化合物体外抗ADP、AA及THR诱导的血小板聚集活性,分析小分子化合物的抗血小板聚集活性与小分子-血小板亲和相互作用之间的关系。第四部分采用ACE、PFACE及FACE三种电泳模式评价了巨噬细胞与柚皮苷等小分子化合物的亲和相互作用。其中,PFACE模式定性评价了巨噬细胞和小分子化合物的亲和相互作用,FACE利用细胞的嗜线性测定了巨噬细胞和小分子的结合常数。此外,将巨噬细胞作为假固定相用于柠檬提取物中潜在活性成分的分析中。第五部分为实验总结和展望。由本文的测定结果可知,CE可用于测定血小板在线聚集率、评价药物的抗血小板聚集活性,评价血小板-小分子及巨噬细胞-小分子的亲和相互作用。总之,基于CE作为分离、分析手段所具有的优势,CE将是一种具有潜力的方法用于在线评价细胞与药物的相互作用,包括结合常数测定,细胞电泳分析及细胞释放物质分析检测等。
【关键词】：亲和相互作用 ACE 血小板 巨噬细胞 小分子化合物
【学位授予单位】：重庆大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：O658.9;R285
【目录】：

• 中文摘要3-4
• 英文摘要4-8
• 缩略词表8-9
• 1 绪论9-25
• 1.1 亲和作用简介9-11
• 1.1.1 亲和作用研究对象9-10
• 1.1.2 亲和作用定量方法10-11
• 1.2 亲和作用研究方法11-14
• 1.2.1 基于混合物物化特性分析的亲和作用研究方法11
• 1.2.2 基于物质分离的亲和作用研究方法11
• 1.2.3 毛细管电泳用于亲和作用研究11-14
• 1.3 血小板简介及中药抗血小板聚集研究进展14-17
• 1.4 巨噬细胞简介17-20
• 1.5 课题研究目的、意义、及内容20-25
• 1.5.1 课题的研究目的与意义20
• 1.5.2 课题的研究内容20-25
• 2 CE作为一种新方法用于评价药物抗血小板聚集活性25-35
• 2.1 引言25-26
• 2.2 仪器及试剂26-27
• 2.3 实验方法27-28
• 2.3.1 血小板分散液制备27
• 2.3.2 比浊法测定延胡索抗血小板聚集27
• 2.3.3 毛细管电泳分析血小板在线聚集27-28
• 2.3.4 毛细管电泳法测定延胡索提取物对THR诱导的血小板聚集的抑制作用28
• 2.3.5 延胡索提取物对THR诱导的血小板聚集的抑制作用的计算28
• 2.4 实验结果及讨论28-33
• 2.4.1 血小板的电泳特征及血小板与THR的在线作用28-30
• 2.4.2 延胡索提取物对THR诱导血小板聚集的抑制作用30-31
• 2.4.3 比浊法及毛细管电泳法测定延胡索提取物抗THR诱导血小板聚集活性比较31-33
• 2.5 小结33-35
• 3 开管亲和毛细管电色谱法评价血小板和小分子的亲和相互作用35-47
• 3.1 引言35
• 3.2 仪器及试剂35-36
• 3.3 实验方法36-39
• 3.3.1 血小板和小分子亲和作用评价36-38
• 3.3.2 抗血小板聚集活性测定38
• 3.3.3 亲和作用与抗血小板聚集活性关系分析38-39
• 3.4 实验结果及讨论39-45
• 3.4.1 毛细管涂层长度的测定与涂层表征39-40
• 3.4.2 小分子与血小板亲和作用评价40-42
• 3.4.3 小分子体外抗血小板聚集活性评价42-45
• 3.5 小结45-47
• 4 三种电泳模式评价巨噬细胞和小分子的亲和相互作用47-61
• 4.1 引言47
• 4.2 仪器及试剂47-48
• 4.3 实验方法48-50
• 4.3.1 巨噬细胞培养48
• 4.3.2 ACE评价小分子和巨噬细胞的亲和相互作用48
• 4.3.3 PFACE评价小分子和巨噬细胞的亲和相互作用48-49
• 4.3.4 FACE测定小分子和巨噬细胞的结合常数49-50
• 4.3.5 巨噬细胞用于分析复杂体系50
• 4.4 实验结果及讨论50-58
• 4.4.1 ACE评价巨噬细胞和小分子的亲和相互作用50-51
• 4.4.2 PFACE评价巨噬细胞和小分子的亲和相互作用51-53
• 4.4.3 FA测定巨噬细胞和柚皮苷的结合常数53-56
• 4.4.4 巨噬细胞用于分析复杂体系56-58
• 4.5 小结58-61
• 5 总结与展望61-65
• 5.1 实验总结61-63
• 5.2 存在问题及展望63-65
• 致谢65-67
• 参考文献67-71
• 附录71
• A. 作者在攻读硕士学位期间所发表的论文71

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