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磷酸二胆碱化壳聚糖仿生衍生物的合成、表面固定化及生物学评价

发布时间:2017-11-19 19:31

  本文关键词:磷酸二胆碱化壳聚糖仿生衍生物的合成、表面固定化及生物学评价


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【摘要】:本研究从仿生学角度出发,首先对壳聚糖进行磷化学改性,制备一种兼有优良抗菌性和生物相容性的新型仿生高分子材料:磷酸二胆碱(PdC)化壳聚糖仿生衍生物(PdCCs);进而通过表面固定PdCCs,发展一种集成抗菌性和生物相容性的仿生表面改性方法。PdCCs的合成基于Atherton-Todd反应,利用二氯化胆碱膦酸酯与壳聚糖衍生物Cs-Tr的氨基反应偶联带双正电荷的PdC(细胞膜结构中两性磷酸胆碱的类似物),得到PdCCs。通过控制投料比,可调控其取代度。1H和31P NMR结果表明PdC基团以磷酰键方式与壳聚糖偶联,当Cs-Tr与二氯化胆碱膦酸酯的投料比为1:3和1:5时,由1H NMR谱确定取代度分别为32%和42%,且与电位滴定和元素分析的结果相一致。同时,采用2,3-环氧丙基三甲基氯化铵(GTMAC)与壳聚糖反应制备单正电荷的季铵化壳聚糖HTCC(1H NMR谱测得取代度为64%)作为对照。GPC结果表明:HTCC和PdCCs具有近似的聚合度(DP)。DSC结果表明:在含水量(0.5~2.5)范围内,与HTCC相比,PdCCs体系表现出明显的冷结晶峰现象,表明存在与生物相容性相关的冷冻结合水,且冷冻结合水含量与PdC基团取代度有关,可以预见PdCCs具有优于HTCC的生物相容性。分别以革兰氏阴性大肠杆菌(E.coli)和革兰氏阳性金黄色葡萄球菌(S.aureus)为细菌模型,测定HTCC和PdCCs的最低抑菌浓度(MIC)和对细菌生长曲线的影响,及细菌内容物释放,表明其均具有优良的广谱抗菌性。细胞毒性实验表明,PdCCs对NIH/3T3的IC50值均大于2 mg/mL,而HTCC64的IC50值约为0.5 mg/mL;血液相容性实验表明,在浓度5mg/m L内,PdCCs和HTCC的溶血率均低于2%,但PdCCs不会像HTCC那样使红细胞发生形变和缩短凝血时间;与BSA相互作用结果表明,与HTCC相比,PdCCs可以有效抑制BSA构象变化。可见,PdCCs较HTCC具备更优异的生物相容性,其原因可能在于其支化的双电荷局域分布可以有效形成水屏蔽层,抑制其与蛋白和生物膜的非特异性相互作用。我们以静电纺丝聚己内酯(PCL)膜为基底,通过表面胺解及醛基化,进而表面固定PdCCs42,并以同样方法表面固定壳聚糖和HTCC64为对照。ATR-FTIR和SEM实验表明,壳聚糖、HTCC64和PdCCs42成功接枝到PCL膜表面,且表面形貌变化显著。接触角、抗菌、细胞毒性和蛋白吸附实验表明:与表面接枝HTCC的PCL膜相比,接枝PdCCs的PCL膜表面具有更佳的亲水性、抗菌性、细胞相容性和抗蛋白吸附能力。可见,基于仿生PdCCs的表面固定化可构建兼有抗菌性和生物相容性的材料表面。综上所述,我们制备的带双正电荷的磷酸二胆碱化壳聚糖仿生衍生物PdCCs具有优异的抗菌性能和生物相容性,且可用于表面改性,获得抗菌性和生物相容性的有效集成,有望在医疗卫生等领域得到应用。
【学位授予单位】:暨南大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2016
【分类号】:O636.1

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本文编号:1204675

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