硝基呋喃类四种药物残留快速检测方法的研究

发布时间：2017-11-20 14:26

  本文关键词：硝基呋喃类四种药物残留快速检测方法的研究

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【摘要】：硝基呋喃类抗生素曾被广泛用于动物疾病预防和治疗,或作为添加剂促进动物生长。因硝基呋喃对人类有潜在的致癌和致突变危险,现已被禁用于动物养殖中。该类抗生素抗菌谱广,价格低廉,违规使用情况较为严重,尤其是呋喃西林、呋喃妥因、呋喃它酮和呋喃唑酮四种药物。目前关于这4种硝基呋喃类抗生素代谢物(SEM、AHD、AMOZ和AOZ)的检测方法的报道大部分免疫检测法为ELISA,有关于直接竞争化学发光酶免疫分析检测方法(dc-CLEIA)的报道较少。而且在已报道的胶体金免疫层析方法中,绝大多数是检测单一硝基呋喃类抗生素代谢物残留的,而能同时检测多种该类抗生素残留已成发展的趋势。本文旨在建立SEM、AHD、AMOZ和AOZ的直接竞争化学发光酶免疫分析方法,建立可以同时检测SEM、AHD、AMOZ和AOZ的胶体金免疫层析方法。1、SEM、AHD、AMOZ和AOZ的dc-CLEIA的建立。本试验通过碳二亚胺法成功制备了酶标物CPAMOZ-HRP、CPAOZ-HRP、CPAHD-HRP和CPSEM-HRP。根据本试验建立的AMOZ dc-CLEIA方法可知:在0.0625-8 ng/mL范围内,标准曲线线性方程为y=-0.397x+0.286,R2=0.992,IC50为0.289 ng/mL;批内和批间变异系数分别为2.24%和3.21%;样品最低检出限为0.0596μg/kg,添加AMOZ的回收率范围为85%-91.93%。根据本试验建立的AOZ dc-CLEIA方法可知:在0.0625-8 ng/mL范围内,标准曲线线性方程为y=-0.329x+0.274,R2=0.992,IC50为0.206ng/mL;批内和批间变异系数分别为3.31%和5.48%;样品最低检出限为0.1052μg/kg,添加AOZ的回收率范围为78%-103%。根据本试验建立的SEM dc-CLEIA方法可知:在0.0625-8 ng/mL范围内,标准曲线线性方程为y=-0.35x+0.302,R2=0.991,IC50为0.271 ng/mL;批内和批间变异系数分别为2.37%和2.6%;样品最低检出限为0.1165μg/kg,添加SEM的回收率范围为82%-95%。根据本试验建立的AHD dc-CLEIA方法可知:在0.125-32 ng/mL范围内,标准曲线线性方程为y=-0.358x+0.427,R2=0.992,IC50为0.625 ng/mL;批内和批间变异系数分别为3.86%和5.93%;样品最低检出限为0.3635μg/kg,添加AHD的回收率范围为75%-94%。2、建立同时检测SEM、AHD、AMOZ和AOZ的胶体金免疫层析方法。研制的硝基呋喃类四种抗生素代谢物的胶体金试纸条:AOZ灵敏度可达到0.75 ng/mL,AMOZ、AHD和SEM为1ng/mL。该方法特异性好,与硝基呋喃类母药及其代谢物、磺胺类药物、甲硝唑等不发生交叉反应。胶体金试纸条测定的20份空白样本假阳性率为0,测定的50份阳性样本假阴性率为0。在实际样品检测中,胶体金试纸条检测结果与ELISA检测结果一致。
【学位授予单位】：中国农业科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：O657.63

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本文编号：1207476