毛细管电泳—电化学发光灵敏检测药物及药物与蛋白相互作用研究

发布时间：2017-12-20 22:06

  本文关键词：毛细管电泳—电化学发光灵敏检测药物及药物与蛋白相互作用研究　出处：《信阳师范学院》2016年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：毛细管电泳(CE)具有分离效率高、分析耗时短、样品消耗量少和经济节约等优点,使分析化学得以从微升水平进入纳升水平,并使单细胞分析,乃至单分子分析成为可能。电化学发光(ECL)具有灵敏度高、仪器设备简单、操作方便、易于实现自动化等特点,广泛地应用于生物、医学、药学、临床、环境、食品、免疫和核酸杂交分析和工业分析等领域。基于CE的高分离效率、ECL的高检测灵敏度,本论文充分采用CE-ECL联用技术开展了毛细管电泳电化学发光灵敏检测药物及药物与蛋白相互作用的研究等方面工作。主要创新研究内容如下：1.发展了一种基于联吡啶钌分离检测酒石酸美托洛尔(ME)和富马酸比索洛尔(BF)的CE-ECL新方法,并开展了药物与蛋白相互作用的研究。对影响CE分离和ECL检测的实验条件,如：添加剂的种类、浓度、缓冲溶液的浓度和pH、分离电压及检测电位等进行了系统的研究。在优化的实验条件下,ME和BF在10 min内得到了良好分离和检测。ME和BF的线性范围分别是0.05～60μmol L~(-1)和0.5～40 μmol L~(-1); ME和BF的检出限LODs(S/N＝3)分别为1.9×10-9和9.4×10~(-8) mol L~(-1);在人尿样中ME和BF的定量限LOQs (S/N=10)分别为3.3×10-7 mol L~(-1)和1.4×10-6 mol L~(-1)。ME和BF在日内迁移时间RSDs分别为4.5%和6.7%,日间迁移时间RSDs分别为7.4%和7.9%；日内峰面积RSDs分别为2.1%和3.8%,日间峰面积RSDs分别为3.1%和5.5%。发展的CE-ECL新方法成功应用于人尿样中的ME和BF的检测,加标回收率在89.0%~(-1)26.0%,RSDs不大于7.4%。利用发展的方法研究了ME和BF分别与人血清白蛋白(HSA)相互作用,得到ME和BF与HSA的结合位点分别为1.2和1.1,结合常数分别为2.8 ×103 L mol~(-1)和2.7×103 L mol~(-1)。2.建立了一种CE结合Ru(bpy)32+-ECL灵敏检测四种局麻药奴佛卡因(PAH)、丁卡因(TCH)、丙美卡因(PCH)和地布卡因(CIN)的新方法。使用铀掺杂的普鲁士蓝(Eu-PB)修饰工作电极提高目标物检测灵敏度。研究了影响CE分离、ECL检测的实验条件,如：添加剂的种类及浓度、缓冲溶液浓度和pH、分离电压和检测电位等。在优化实验条件下,上述四种局麻药能在10 min内得到基线分离。PAH、 TCH、PCH和CIN的线性范围分别是0.2～75μmol L~(-1)、0.5～50μmol L~(-1)、0.5～100μmolL~(-1)和0.5～100 μmol L~(-1)。PAH、TCH、PCH和CIN的LODs(S/N=3)分别为5.5×10~(-8) mol L~(-1),9.6×10~(-8) mol L~(-1)、2.5 ×10~(-8) mol L~(-1)和3.5×10~(-8) mol L~(-1)。在人尿样中,PAH、TCH、PCH和CIN的LOQs(S/N=10)分别为5.9 ×10-7 mol L~(-1)、9.2×10-7 mol L~(-1),8.3×10-7 mol L~(-1)和5.0 ×10-7 mol L~(-1)。四种分析物日内迁移时间RSDs为1.2%～2.5%,日间RSDs为2.4%～4.9%；日内峰面积RSDs为1.7%～3.3%；日间峰面积RSDs为2.2%～5.6%。PAH、TCH、PCH和CIN在人尿样中的加标回收率为87.6%～107.7%, RSDs不大于5.9%。以PAH为例,开展了PAH与HSA之间的相互作用研究,得到二者之间的结合位点是1.03,结合常数是2.4 ×104L mol~(-1)。3.提出了一种基于金纳米(AuNPs)增强CE-ECL信号灵敏检测p-受体阻断剂心得安(Pro)和醋丁酰心安(Ace)的新方法。对影响CE分离、ECL检测以及AuNPs的用量进行了系统优化。在优化实验条件下,Pro的线性范围是0.01～100μmol L~(-1), LOD(S/N=3) 为3.6×10-9 mol L~(-1); Ace的线性范围是0.02~(-1)00μmol L~(-1), LOD (S/N ＝3)是5.0×10-9 mol L~(-1)。人尿样中Pro和Ace的LOQs (S/N=10)分别为1.1×10-7 mol L~(-1)和9.5 ×10~(-8) mol L~(-1)。 Pro和Ace在日内的迁移时间RSDs为1.9%～2.4%,日间RSDs为2.9%～3.8%；日内峰面积RSDs为3.2%～3.7%,日间峰面积RSDs为4.3%4.6%。将提出的CE-ECL新方法应用于人尿样中Pro和Ace的检测,加标回收率为98.0%～106.7%,RSDs不大于4.2%。此外,我们还以Pro为例,研究其与HSA之间的相互作用,所得结合位点为1.0,结合常数为2.3 ×104 L mol~(-1)。
【学位授予单位】：信阳师范学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：O657;TQ460

【参考文献】

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1 张效伟;张召香;;二维毛细管电泳电化学检测尿样中的β-阻断剂[J];分析化学;2010年05期

2 ;Electrocatalytic oxidation of methanol at platinum electrode modified with Eu-Fe cyanide-bridged binuclear complexes[J];Chinese Chemical Letters;2010年03期

3 ;Capillary electrophoresis with electrochemiluminescence detection for the analysis of quinolone drugs and pharmacokinetics study[J];Chinese Chemical Letters;2008年08期

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本文编号：1313569