流动注射法探究模拟酶催化过氧亚硝酸根氧化酪氨酸的动力学特征

发布时间：2018-01-04 11:11

  本文关键词：流动注射法探究模拟酶催化过氧亚硝酸根氧化酪氨酸的动力学特征　出处：《光谱学与光谱分析》2016年12期 　论文类型：期刊论文

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【摘要】：过氧亚硝酸根作为生物体内高活性自由基,能损伤多种生物大分子进而引起一系列重大疾病,对其含量测定和反应机制的研究具有重要意义。过氧亚硝酸根性质活泼,反应速率快,捕捉其动态过程十分困难。本文首次利用流动注射分析仪探究在不同模拟酶血红蛋白和氯化血红素的催化下,过氧亚硝酸根氧化酪氨酸体系的动力学特征。结果表明:过氧亚硝酸根在两种酶催化下氧化酪氨酸的过程均遵循MichaelisMenten的动力学规律;根据米氏常数K_m和最大初速率V_(max),推断其反应机制,经模拟酶催化的过氧亚硝酸根能直接氧化与模拟酶结合后的酪氨酸快速生成酪氨酸二聚体,未生成·OH和O_2~-·。此外,我们还检测了不同温度、pH下两种模拟酶催化的速率常数,得到血红蛋白催化该体系的最适条件为25℃和pH 8.0,速率常数k_(cat)=1.035×10~6 mol·L~(-1)·s~(-1),氯化血红素适宜在37℃和pH 9.5的条件下催化该体系,速率常数k_(cat)=6.842×10~5 mol·L~(-1)·s~(-1);比较动力学参数K_m~(Hb)(4.46μmol·L~(-1))K_m~(Hemin)(4.90μmol·L~(-1)),V_(max)~Hb(Hb)(0.072ΔI_F/s)V_(max)~(Hemin)(0.026ΔI_F/s),发现最适条件下血红蛋白的速率常数大于氯化血红素,得到血红蛋白对于该体系的催化活性高于氯化血红素。以上结果为探究酶催化法测定过氧亚硝酸根含量及其反应机理提供动力学参数,对于防治生物体内自由基引起的相关疾病与诊断新技术的开发奠定理论基础。
[Abstract]:As a highly active free radical, peroxynitrite can damage many kinds of biological macromolecules and cause a series of major diseases. It is of great significance to determine the content of peroxynitrite and study its reaction mechanism. It is very difficult to capture its dynamic process. This paper first used flow injection analyzer to explore the catalysis of different mimic enzyme hemoglobin and hemin. Kinetic characteristics of tyrosine oxidation by peroxynitrite. The results show that:. The oxidation of tyrosine by peroxynitrite followed the kinetic law of MichaelisMenten. The reaction mechanism was inferred based on the Michaelis constant Kstack and the maximum initial rate V _ S _ max _ I _ _ _. The peroxynitrite catalyzed by the mimic enzyme can directly oxidize tyrosine to form tyrosine dimer without OH and O _ 2O _ 2- 路. In addition, different temperatures have been detected. The optimum conditions of hemoglobin catalyzed the system were obtained at 25 鈩，

本文编号：1378232