MscL表达纯化及其寡聚态的质谱解析

发布时间：2018-05-21 13:18

  本文选题：机械敏感性通道蛋白 + 过表达　； 参考：《南京理工大学》2017年硕士论文

【摘要】：高电荷机械敏感性离子通道(the Mechanosensitive channel of Large conductance,MscL)是生物膜离子通道中一种重要的膜蛋白,MscL作为一种能量释放阀可以在一定程度上防止细胞因渗透压的剧烈变化而裂解。关于这种膜蛋白的研究热点很多,MscL通道直径大小,生理功能以及不同实验方法得到的关于其低聚物形态不一致的观点。本研究主要研究MscL蛋白的低聚物形态问题,要想探究这个问题首先要做的是分子克隆将MscL基因片段插入到PET-28载体再做转化。其次使用IPTG诱导表达,优化表达条件后进行大量表达。对得到的菌体进行破碎,分离出脂溶性蛋白后使用AKTA系统进行纯化,得到很高纯度的MscL蛋白后做质谱分析。由于膜蛋白是脂溶性蛋白并且难结晶,所以在纯化和分析过程中添加表面活性剂DDM溶解膜蛋白,利用非变性质谱的高灵敏度的特点克服膜蛋白难结晶的困难。最后通过质谱检测MscL蛋白的低聚物形态。为了高效表达和得到更好的质谱信号,在本实验中还做了MscL 蛋白与 GFP(Green Fluorescent Protein)和 TrxA(Thioredoxin)的融合表达。研究MscL蛋白为研究原核细胞膜离子通道提供了新的切入点和研究模型。
[Abstract]:MscL protein is a kind of important membrane protein in the ion channel of biological membrane . MscL is an important membrane protein in the ion channel of biological membrane . MscL is used as an energy release valve to prevent the cell from being cleaved by the violent changes of osmotic pressure .
【学位授予单位】：南京理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：Q51;O657.63

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 范仲文;;质谱法在生化中的应用[J];生命的化学(中国生物化学会通讯);1982年05期

2 陈耀祖,李宏,华苏明,邱望凯,丁家治;质谱中的立体化学效应——Ⅴ.用反应质谱法检测有机化合物的手性[J];科学通报;1987年12期

3 李贵强;四极质谱法测定重馏分油的烃类组成[J];山东科学;1999年02期

4 周亚飞;李操;肖赛金;陈焕文;张兴磊;;常压环境下铅笔芯的质谱放电行为研究[J];岩矿测试;2013年03期

5 杨明太;吴伦强;张连平;;质谱、α谱联合测定钚年龄[J];核电子学与探测技术;2009年05期

6 魏杰,张冰,郑海洋,章莲蒂,孔祥和,夏柱红,顾学军;激光质谱法对痕量污染物的快速检测[J];中国科学(A辑);2001年05期

7 李海泉,齐陈泽,翟建军,赵凡智,陈能煜,杨弟伦,郝秀梅;dl-2,3-二氰基-2,3-二(p-取代苯基)丁二酸二乙酯的质谱裂解机理研究[J];兰州大学学报;1993年03期

8 仇九子,包轶文,董克君,寅新艺,何明,武绍勇,管永精,姜山;加速器质谱测量~(182)Hf的效率研究[J];物理实验;2005年04期

9 黄潇;陈志威;聂秀利;徐英;陈建忠;严惟力;;质谱在生命科学领域中的应用进展[J];标记免疫分析与临床;2010年03期

10 焦念志,王荣,黄庆文;~(15)N示踪-离子质谱法测定新生产力的研究[J];海洋与湖沼;1993年01期

相关会议论文 前4条

1 聂玲清;纪红玲;;电感耦合等离子体磁质谱法测定无尘产品中痕量氯[A];2005年全国无机质谱、同位素质谱和质谱仪器学术报告会论文集[C];2005年

2 杨立;刘孟德;;质谱法海水重金属元素在线测量系统[A];2009重金属污染监测、风险评价及修复技术高级研讨会论文集[C];2009年

3 肖维强;黄桂颖;戴宏芬;陈悦娇;黄炳雄;马应丹;王晓容;;RP-HPLC法测定水果中蛇麻醇酯含量方法的初步研究[A];科技与创新——广东园艺科技论文集（广东省园艺学会第九次会员大会暨学术研讨会论文集）[C];2010年

4 谢圣高;李刚;王立轩;宁勇;原厚;青山俊文;;飞行质谱法测定血清脑硫苷脂[A];中医药生物化学与分子生物学通讯[C];2008年

相关博士学位论文 前10条

1 龚晓云;质谱单细胞分析方法的建立及其应用[D];清华大学;2015年

2 陈颖茜;基于质谱成像的人鼻咽癌代谢组学研究[D];北京协和医学院;2016年

3 林向成;基于质谱的疾病标记物高灵敏度生物传感新方法研究[D];湖南大学;2016年

4 张良晓;气相色谱—质谱定性定量分析新方法研究[D];中南大学;2011年

5 马潇潇;基于敞开式离子源的质谱在线反应监测方法研究[D];清华大学;2012年

6 周晓荣;电子自旋共振和质谱在化学电源研究中的应用[D];武汉大学;2004年

7 张瑞萍;分子间弱相互作用的冷喷雾质谱以及几种有机分子的质谱裂解反应研究[D];中国协和医科大学;2004年

8 拓飞;发展~（182）Hf的加速器质谱测量技术[D];兰州大学;2008年

9 赵景红;特殊样品预处理与气相色谱/质谱在线联用技术[D];中国科学院研究生院（大连化学物理研究所）;2006年

10 喻凌寒;液相色谱—质谱联用在食品和临床检测中的应用研究[D];中国科学院研究生院（广州地球化学研究所）;2007年

相关硕士学位论文 前10条

1 吴培琳;正电子发射断层显像与质谱成像互补结合寻找肿瘤相关分子标志物初探[D];北京协和医学院;2015年

2 汤惠芬;新型质谱电离方法的改进及其在细胞分析中的应用[D];南京大学;2016年

3 李喜玲;人体指甲中尿酸定量方法的建立及硫代脯氨酸结构同位素标记新型质谱衍生化试剂的开发[D];延边大学;2016年

4 王陈璐;大气压电离源质谱中碳硫键断裂反应研究[D];浙江工业大学;2016年

5 叶茂;肽图结合质谱筛选名贵中药阿胶的特异性肽段与鉴定研究[D];成都中医药大学;2016年

6 魏京楠;MscL表达纯化及其寡聚态的质谱解析[D];南京理工大学;2017年

7 罗小;通过确定初始电离位点来预测吲哚类生物碱的质谱特征裂解规律[D];中南大学;2011年

8 王梅杰;酸性氨基酸在多肽质谱裂解中作用的研究[D];山东大学;2012年

9 张鹏军;碱性氨基酸在多肽质谱断裂中作用机理的研究[D];山东大学;2012年

10 李娇;基于农药残留分析的质谱裂解数据库建立[D];青岛科技大学;2012年

，

本文编号：1919353