超高效合相色谱法测定火龙果果酒中游离氨基酸的含量
发布时间：2019-09-12 19:56
【摘要】：建立超高效合相色谱测定食品中游离氨基酸的方法。选取Acquity UPC2Torus Diol(3.0 mm×100 mm,1.7μm)色谱柱,流动相由A(超临界二氧化碳)和B(V(甲醇)∶V(乙腈)=1∶1)组成,2.5 mmol/L乙酸铵作为改性剂,流速2.0 m L/min,紫外检测器波长280 nm,补偿范围330~430 nm,背压1 800 psi。结果表明,该方法具有良好的线性(R2=0.999 0~0.999 8),分离度高于1.22,检出限和定量限范围分别为23~57 ng/L和70~178ng/L,线性范围为20~400μg/m L,加标回收率在85.6%~101.2%之间。该方法被成功用于火龙果酒样品中游离氨基酸含量的测定,也为分析其他食品基质中游离氨基酸分布情况提供了新的方法。
【图文】：
2～5.0min98%～70%A，5.0～15.0min70%A，15.0～17.5min70%～98%A。1.3.5系统适用性实验按照徐莉等［16］的方法进行线性、检测限和定量限、灵敏度和精密度、回收率等系统适用性考察。2结果与分析2.1色谱柱筛选色谱的分离效果很大程度上取决于色谱填料及其键合方式［12］。本实验选择AcquityUPC2BEH(3.0mm×100mm，1.7μm)、HSSC18SB(3.0mm×100mm，1.8μm)、TorusDiol(3.0mm×100mm，1.7μm)和TorusPIC(3.0mm×100mm，1.8μm)四款UPC2色谱柱，以选择性、分离度为主要指标进行筛查，结果见图1。图1不同色谱柱分离氨基酸混标衍生物的色谱图Fig．1Chromatogramsofaminoacidderivativesseparatedwithdifferentchromatographycolumns色谱柱AcquityUPC2TorusDiol填料为高密度二醇，其表面键合相的色谱性能与传统的未键合硅胶固定相相当，可以有效改善酸性或碱性化合物分离过程中的整体稳定性。由图1可知，TorusDiol色谱柱能够将多数氨基酸衍生物有效分离，具有较好选择性。2.2改性剂的选择氨基酸是一类含有碱性氨基和酸性羧基的有机物，在水溶液中通常以兼性离子或偶极离子的形式存在，表现出典型的两性电解质特征。改变流动相pH环境会影响氨基酸衍生物的电离特性，进而有助于改善峰形［16］。本实验选择三氟乙酸或乙酸铵作为改性剂，以考察改性剂对氨基酸衍生物峰形的影响。结果发现乙酸铵对氨基酸衍生物的拖尾峰形有较好的改善，图2
分析与检测2017年第43卷第12期(总第360期)201分别为添加改性剂前后氨基酸标品衍生物的色谱图。鉴于乙酸铵本身是一种强电解质盐，容易对超临界系统造成影响，轻则损伤色谱柱、降低柱效，重则堵塞系统管路、引起压力激烈波动，故将2.5mmol/L的乙酸铵作为改性剂。图2添加改性剂分离氨基酸标品衍生物的色谱图Fig．2Chromatogramsofaminoacidderivativesseparatedwithorwithoutmobilephasemodifier2.3助溶剂选择超临界流体色谱是以超临界CO2为主体，以少量甲醇、乙腈或异丙醇等有机溶剂为助溶剂，通过调整流动相的极性改变对分析物的溶解性，进而达到改变目标物洗脱顺序和优化分离效果的目的［17］。本实验比较了甲醇、乙腈、甲醇和乙腈混合溶液等作为助溶剂对氨基酸衍生物的分离效果。由图3可以看出，在助溶剂甲醇中加入等体积乙腈，极性相对降低，流动相的溶解能力也得到相应改变，部分氨基酸衍生物的保留变弱，，出峰时间推迟，使得部分氨基酸衍生物之间的分离效果提高。虽然超临界流体系统中采用的助溶剂比例不高，但对目标化合物的保留强度即出峰时间快慢有着重要影响，这对于超临界流体色谱方法开发、色谱条件优化具有非常重要的意义。图3不同助溶剂分离的氨基酸衍生物标品的色谱图Fig．3Chromatogramsofaminoacidderivativesseparatedwithdifferentco－solvents2.4其他色谱条件优化超高效合相色谱技术结合了亚2μm填料和高效超临界流色谱两项技术的优点，具有较高的扩散系数和传质速率，分析时间更短，分离效能更高。由于温度、压力和流速的微小变化都能引起流动相密度改变，进而改变对分析物的溶解能力，所以调节柱温、自动调节备压都可以调节目标化合物的分离效果［16－17］。本实验考察了自动调节背压(1500?
【作者单位】： 中国热带农业科学院农产品加工研究所农业部农产品加工质量安全风险评估实验室;中国热带农业科学院农产品加工研究所;华中农业大学食品科技学院;铜仁市食品药品检验所;
【基金】：中国热带农业科学院基本科研业务费专项资金(1630122017021) 湛江市科技计划项目(2016A03012) 农业部公益性行业(农业)科研专项(201303077)
【分类号】：O657.7;TS262.7
本文编号：2535317
【图文】：
2～5.0min98%～70%A，5.0～15.0min70%A，15.0～17.5min70%～98%A。1.3.5系统适用性实验按照徐莉等［16］的方法进行线性、检测限和定量限、灵敏度和精密度、回收率等系统适用性考察。2结果与分析2.1色谱柱筛选色谱的分离效果很大程度上取决于色谱填料及其键合方式［12］。本实验选择AcquityUPC2BEH(3.0mm×100mm，1.7μm)、HSSC18SB(3.0mm×100mm，1.8μm)、TorusDiol(3.0mm×100mm，1.7μm)和TorusPIC(3.0mm×100mm，1.8μm)四款UPC2色谱柱，以选择性、分离度为主要指标进行筛查，结果见图1。图1不同色谱柱分离氨基酸混标衍生物的色谱图Fig．1Chromatogramsofaminoacidderivativesseparatedwithdifferentchromatographycolumns色谱柱AcquityUPC2TorusDiol填料为高密度二醇，其表面键合相的色谱性能与传统的未键合硅胶固定相相当，可以有效改善酸性或碱性化合物分离过程中的整体稳定性。由图1可知，TorusDiol色谱柱能够将多数氨基酸衍生物有效分离，具有较好选择性。2.2改性剂的选择氨基酸是一类含有碱性氨基和酸性羧基的有机物，在水溶液中通常以兼性离子或偶极离子的形式存在，表现出典型的两性电解质特征。改变流动相pH环境会影响氨基酸衍生物的电离特性，进而有助于改善峰形［16］。本实验选择三氟乙酸或乙酸铵作为改性剂，以考察改性剂对氨基酸衍生物峰形的影响。结果发现乙酸铵对氨基酸衍生物的拖尾峰形有较好的改善，图2
分析与检测2017年第43卷第12期(总第360期)201分别为添加改性剂前后氨基酸标品衍生物的色谱图。鉴于乙酸铵本身是一种强电解质盐，容易对超临界系统造成影响，轻则损伤色谱柱、降低柱效，重则堵塞系统管路、引起压力激烈波动，故将2.5mmol/L的乙酸铵作为改性剂。图2添加改性剂分离氨基酸标品衍生物的色谱图Fig．2Chromatogramsofaminoacidderivativesseparatedwithorwithoutmobilephasemodifier2.3助溶剂选择超临界流体色谱是以超临界CO2为主体，以少量甲醇、乙腈或异丙醇等有机溶剂为助溶剂，通过调整流动相的极性改变对分析物的溶解性，进而达到改变目标物洗脱顺序和优化分离效果的目的［17］。本实验比较了甲醇、乙腈、甲醇和乙腈混合溶液等作为助溶剂对氨基酸衍生物的分离效果。由图3可以看出，在助溶剂甲醇中加入等体积乙腈，极性相对降低，流动相的溶解能力也得到相应改变，部分氨基酸衍生物的保留变弱，，出峰时间推迟，使得部分氨基酸衍生物之间的分离效果提高。虽然超临界流体系统中采用的助溶剂比例不高，但对目标化合物的保留强度即出峰时间快慢有着重要影响，这对于超临界流体色谱方法开发、色谱条件优化具有非常重要的意义。图3不同助溶剂分离的氨基酸衍生物标品的色谱图Fig．3Chromatogramsofaminoacidderivativesseparatedwithdifferentco－solvents2.4其他色谱条件优化超高效合相色谱技术结合了亚2μm填料和高效超临界流色谱两项技术的优点，具有较高的扩散系数和传质速率，分析时间更短，分离效能更高。由于温度、压力和流速的微小变化都能引起流动相密度改变，进而改变对分析物的溶解能力，所以调节柱温、自动调节备压都可以调节目标化合物的分离效果［16－17］。本实验考察了自动调节背压(1500?
【作者单位】： 中国热带农业科学院农产品加工研究所农业部农产品加工质量安全风险评估实验室;中国热带农业科学院农产品加工研究所;华中农业大学食品科技学院;铜仁市食品药品检验所;
【基金】：中国热带农业科学院基本科研业务费专项资金(1630122017021) 湛江市科技计划项目(2016A03012) 农业部公益性行业(农业)科研专项(201303077)
【分类号】：O657.7;TS262.7
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本文编号：2535317
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