添加剂对漆酶酸碱稳定性的影响及保护机理

发布时间：2019-11-25 14:41

【摘要】：为了提高漆酶的稳定性,研究了甘油、肌醇和山梨醇3种添加剂对漆酶酸碱稳定性的影响,并通过紫外光谱、荧光光谱和圆二色谱分析了添加剂对漆酶的保护机理。研究表明,添加剂对漆酶的保护效果与添加剂的种类和浓度有关。在p H 3的缓冲液中,当肌醇的浓度为0.2 mol/L时漆酶的相对酶活达到最大值(125%),当甘油或山梨醇浓度增加时,漆酶的相对酶活逐渐增大;当添加的浓度相同时,甘油对漆酶的保护效果强于山梨醇,当添加的浓度为0.6 mol/L时,甘油使漆酶相对酶活提高了29%,山梨醇使漆酶相对酶活提高了15%。漆酶适宜的p H值范围为2~5,加入添加剂后提高了漆酶的酸碱稳定性。通过光谱分析可知,通过与漆酶分子间形成氢键,甘油、肌醇和山梨醇可以提高漆酶在溶液中的酸碱稳定性。
【图文】：

曲线,漆酶,酶活,添加剂

研究报告2017年第43卷第12期(总第360期)21启动反应，测定3min内在420nm处反应液的吸光度值的变化，以每分钟转化1μmol底物定义为1个酶活力单位(U)。2结果与分析2.1不同浓度的添加剂对漆酶酶活的影响为了便于研究添加剂对漆酶酸碱稳定性的影响，首先考察添加剂浓度对漆酶酶活的影响，确定添加剂的适宜浓度。在pH3的漆酶溶液中加入不同浓度的添加剂，测定其酶活并与未加添加剂的漆酶溶液比较，计算漆酶的相对酶活。从图1可知，随着肌醇浓度的增加，漆酶的相对酶活先增大后减校当肌醇的浓度达到0.2mol/L时，，漆酶的相对酶活达到最大，故肌醇的适宜浓度为0.2mol/L。加入过量的肌醇，漆酶的活性反而降低，这可能是由于过量的肌醇会阻碍漆酶与ABTS结合，进而使酶活性降低。刘彩琴［9］等人的研究结果也表明加入过多的添加剂会使酶活性下降。添加甘油和山梨醇的相对酶活曲线较为相似，都是随着浓度的上升，漆酶的相对酶活逐渐增大，当添加的浓度相同时加入甘油后漆酶的相对酶活大于加入山梨醇，说明甘油的效果强于山梨醇。当甘油或山梨醇的添加量达到0.6mol/L时，加入甘油时漆酶相对酶活提高了29%，加入山梨醇后提高了15%。在考察的浓度范围内由于甘油和山梨醇的相对酶活曲线没有出现极值，因此我们以0.6mol/L作为甘油和山梨醇的适宜浓度，考察其对漆酶的保护效果。从图1我们还可看出，添加剂对漆酶的保护效果与添加剂的类型和浓度有关，因此选择合适的添加剂及其适宜的浓度对其在实际中的应用具有十分重要的意义。图1加入添加剂后漆酶的相对酶活Fig．1Therelativeenzymeactivityoflaccaseafteraddingadditives2.2添加剂对漆酶的酸碱稳定性的影响从图2可知，随着溶液pH值的升高，漆酶的相对酶活先增大后减小，在溶液pH3

曲线,漆酶,酶活,添加剂

奶砑恿看?到0.6mol/L时，加入甘油时漆酶相对酶活提高了29%，加入山梨醇后提高了15%。在考察的浓度范围内由于甘油和山梨醇的相对酶活曲线没有出现极值，因此我们以0.6mol/L作为甘油和山梨醇的适宜浓度，考察其对漆酶的保护效果。从图1我们还可看出，添加剂对漆酶的保护效果与添加剂的类型和浓度有关，因此选择合适的添加剂及其适宜的浓度对其在实际中的应用具有十分重要的意义。图1加入添加剂后漆酶的相对酶活Fig．1Therelativeenzymeactivityoflaccaseafteraddingadditives2.2添加剂对漆酶的酸碱稳定性的影响从图2可知，随着溶液pH值的升高，漆酶的相对酶活先增大后减小，在溶液pH3时漆酶的相对酶活达到最大值。漆酶的相对酶活在缓冲液pH2～5时都维持在了100%以上，可以看出其适宜的pH值范围应该在pH2～5。当溶液为pH2～3时，加入甘油对漆酶的保护效果要好于山梨醇或肌醇，而在pH4的溶液中加入山梨醇后漆酶的相对酶活高于甘油或肌醇。总的来说甘油的保护效果要好于山梨醇和肌醇，在pH2和3的溶液中能使漆酶的相对酶活分别提高53%和120%。当溶液pH＞5时漆酶的酶活下降较快，加入添加剂对漆酶的保护效果不明显。在pH6的漆酶溶液中，加入添加剂后漆酶的相对酶活提高了不到10%。添加剂对漆酶的保护效果与漆酶的适宜pH值范围有关，当溶液pH值超过其适宜范围时，添加剂对漆酶的保护效果下降。从图2不难看出，添加剂可以提高漆酶在不同pH值溶液中的相对酶活，添加剂增强了漆酶的酸碱稳定性。图2加入添加剂后漆酶在不同pH溶液中的酶活Fig．2EnzymeactivityoflaccaseafteraddingadditivesindifferentpHsolutions2.3添加剂对漆酶的保护机理2.3.1漆酶的紫外光谱分析蛋白质的紫外光谱有190～220nm和250～300nm两个吸收峰区［10

【相似文献】