拟南芥GPRAT2蛋白的结构生物学研究
发布时间：2020-03-14 03:03
【摘要】：谷氨酰胺磷酸核糖焦磷酸转酰胺酶(简称GPRAT)是催化嘌呤核苷酸从头合成第一步的关键酶。GPRAT2是GPRAT的三个同工酶之一。新型乙酸苯三唑类化合物DAS734可以通过抑制GPRAT2的催化反应来漂白许多双子叶杂草,DAS734是特异于AtGPRAT2的抑制剂。通过结构生物学方法研究拟南芥GPRAT2和DAS734的作用机制,对了解化合物调节植物的新陈代谢,指导除草剂的合成等具有重要的意义。本篇论文成功构建了 pET-22b-AtGPRAT2(75-461)质粒,转化入大肠杆菌表达蛋白质,使用亲和层析方法纯化得到蛋白质。通过结晶实验,我们最终获得了 11个可供晶体生长的池液条件,经过优化沉淀剂、pH、additives,最终在条件HR2-110-11#优化基础上获得了高质量的蛋白晶体,并收集到了 3.1 A的衍射数据,解析AtGPRAT2蛋白质结构。通过文献中的方法,成功制备了 GPRAT2的抑制剂DAS734。为了得到复合物的结构,使DAS734结合到AtGPRAT2的晶体中,采用两种方法,一种方式是点晶体时加入DAS734,另一种方式是晶体长好后X-射线衍射前,在配制的防冻液中加入DAS734,设置了泡DAS734的时间和浓度梯度,最后共收到了 24套数据,但是解析后结构中都没有DAS734。据报道随着DAS734浓度的增加,AtGPRAT2酶活性逐渐降低,而突变体R264K对于DAS734浓度增加,酶的活性没有影响,因此本实验对pET-22b-AtGPRAT2进行R264K突变且突变成功,突变质粒转入大肠杆菌成功进行表达,纯化得到了较纯的蛋白质,为酶活性实验打下基础。
【图文】：
同步辐射光源逐渐在蛋白质晶体学中发挥了越来越重要的作用。随着逡逑重组蛋白质的生产、纯化的技术的成熟，，生物大分子的结构解析成为较完善技逡逑术，蛋白质结构生物学己经成为基础理论和仪器完备的学科。图１？丨主要表示逡逑了蛋白质晶体学的里程碑式成果及技术发展，这些发明和发展对于蛋白质晶体逡逑学至关重要。逡逑－－逦参”S茫峰澹体义希慑危桑剩″澹殄义希掊澹垮澹睿澹诲澹停椋欤澹郑危慑澹义希危伞殄闻插义希裕澹觯觯澹苠义希玻妫苠澹卞义希诲逖希恚椋㈠义希觯澹危危睿觯鲥澹掊危校剩耍停龋叔义希ｅ义贤迹椋鞍字史矫婢逖Ы獭荆础垮义希疲椋纾保卞澹裕瑁邋澹洌澹觯澹欤铮穑恚澹睿翦澹铮驽澹穑颍铮簦澹椋铄澹悖颍螅簦幔欤欤铮纾颍幔穑瑁荆础垮义希卞义
本文编号：2586892
【图文】：
同步辐射光源逐渐在蛋白质晶体学中发挥了越来越重要的作用。随着逡逑重组蛋白质的生产、纯化的技术的成熟，，生物大分子的结构解析成为较完善技逡逑术，蛋白质结构生物学己经成为基础理论和仪器完备的学科。图１？丨主要表示逡逑了蛋白质晶体学的里程碑式成果及技术发展，这些发明和发展对于蛋白质晶体逡逑学至关重要。逡逑－－逦参”S茫峰澹体义希慑危桑剩″澹殄义希掊澹垮澹睿澹诲澹停椋欤澹郑危慑澹义希危伞殄闻插义希裕澹觯觯澹苠义希玻妫苠澹卞义希诲逖希恚椋㈠义希觯澹危危睿觯鲥澹掊危校剩耍停龋叔义希ｅ义贤迹椋鞍字史矫婢逖Ы獭荆础垮义希疲椋纾保卞澹裕瑁邋澹洌澹觯澹欤铮穑恚澹睿翦澹铮驽澹穑颍铮簦澹椋铄澹悖颍螅簦幔欤欤铮纾颍幔穑瑁荆础垮义希卞义
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