液相色谱中液-固界面上肽/蛋白质的双保留机理研究
发布时间：2020-12-20 03:29
目前,肽和蛋白质在液-固界面上的色谱保留机理研究仍然是生物医学、生物工程相关的分离科学领域的前沿和热点课题。反相液相色谱已被广泛应用于蛋白质组学研究、治疗肽的分离分析中。但是,在肽的分析中,重叠峰的出现、色谱峰不规律问题还一直没有得到解决。传统分离纯化蛋白质中通常采取先沉淀,随后再进行液相色谱分离的方法,存在耗时较长,回收率较低。在所有的一维、二维液相色谱分离中,都需要提高选择性,寻找差异性,最大化的提高分离空间。不同于小分子化合物,多肽和蛋白具有三维空间结构,它们在色谱中的保留行为差别很大。本论文较系统地研究了液-固界面上6种三肽、2种寡肽和4种多肽在反相液相色谱上的“停滞-迁移”双保留行为和双保留机理。进一步探讨了蛋白质在疏水相互作用色谱中的保留行为和热力学性质。这些研究对实际应用中靶向肽和蛋白质药物的工业化生产也具有实际应用价值。本文主要研究了肽和蛋白质在色谱中的双保留机理,主要内容如下:1.文献综述。通过引用156篇文献,对液相色谱分离肽和蛋白质的研究进展、液相色谱中溶质的保留模型、保留模型与保留行为的关系以及计量置换理论模型与应用做了介绍和综述。2.反相液相色谱梯度洗脱下肽的...
【文章来源】：西北大学陕西省 211工程院校
【文章页数】：119 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
色谱中QSRR的研究目标Figure1.1ResearchgoalsofQSRRinChromatography近年来，随着量子化学和计算机技术的发展，QSRR在色谱理论研究领域较为活
图 2.1 三肽的平面结构Figure 2.1 Molecular structures of tripeptides表 2.1 chemdraw 模拟 6 种三肽的结构参数*Table 2.1 Structure parameters of tripeptide from Chemdraw*peptides 3 肽-1 3 肽-2 3 肽-3 3 肽-4 3 肽-5 3 肽-6Boiling Point（K） 1103.73 1103.75 1132.71 1103.75 1103.75 1103.75Meleting Point（K） 745.30 945.30 829.02 945.30 945.30 945.30Critical Temp(K) 1120.67 1120.67 1017.76 1120.67 1120.67 1120.67Critical Pres(Bar) 37.04 37.04 35.01 37.04 37.04 37.04Critical Vol (cm3/mol) 770.50 770.50 748.50 770.50 770.50 770.50Gibbs Energy (kJ/mol) -681.70 -681.70 -751.54 -681.70 -681.70 -681.70Log P -3.23 -3.23 -2.64 -3.23 -3.23 -3.23MR (cm3/mol) 69.56 69.56 66.26 69.56 69.56 69.56Henry′s Law 27.80 27.80 24.40 27.80 27.80 27.80Heat of Form(kJ/mol) -1112.98 -1112.98 -1113.35 -1112.98 -1112.98 -1112.98
图 2.2 RPLC 中非同步进样的三肽色谱图（左）和保留时间（tR）对进样时间（ti）作图（右）Figure 2.2 The chromatograms of tripeptides with different injection time on RPLC and itscorresponding plot of retention vs sampling time色谱柱：Galaksi EF-C18M 商品柱，250×4.6 mm I.D.，粒径 5μm 粒径，孔径 120 ；流动相 A：水+0.1%TFA，流动相 B：乙腈+0.1%TFA ；流速：1.0 mL min-1；检测波长：254nm；梯度洗脱：30 min 内从 0%B-50%B；肽顺序为 A.3 肽-1; B. 3 肽-2; C.3 肽-3; D. 3 肽-4; E.3 肽-5; F. 3 肽-6.2.5.2 RPLC 中三肽迁移过程的临界迁移时间由 2.5.1 中实验发现，在三肽“停滞-迁移”保留现象中，存在一个临界迁移点将色谱过程分为两部分，肽的保留时间（tR）和进样时间（ti）作图，可明显看出整个色谱保留分成了直线部分 SR 和曲线部分 MR。因此，停滞部分 SR 与迁移部分 MR。之间肯定存在着一个临界迁移时间 (critical migration time point, TCMP），同时通过这个临界点可以计算出临界迁移浓度（critical migration concentration point，CCMP），即溶质发生迁移的浓度。在临界迁移浓度 CCMP，可以认为三肽在色谱柱上的迁移速度为 0，
【参考文献】：
期刊论文
[1]一种反相/弱阳离子交换混合模式色谱填料结合质谱在蛋白质组学中的应用[J]. 周珊珊,刘佳玉,张养军,钱小红. 中国科学:生命科学. 2018(02)
[2]混合模式色谱分离材料的研究及其应用进展[J]. 董雪芳,蔡晓明,沈爱金,魏杰,郭志谋,梁鑫淼. 色谱. 2013(04)
[3]生物大分子的混合模式色谱法——传统的色谱观点正在被改变[J]. 耿信笃. 色谱. 2012(01)
[4]弱阳离子交换色谱中疏水作用对蛋白保留的影响[J]. 孙萱,杨云,耿信笃. 分析科学学报. 2010(01)
[5]动力学因素对液相色谱分离整体蛋白的影响[J]. 闵一,陈刚,耿信笃. 色谱. 2009(05)
[6]活性蛋白液相色谱快速分离新方法[J]. 柯从玉,耿信笃. 科学通报. 2008(05)
[7]蛋白质在反相高效液相色谱梯度洗脱条件下保留时间的预测[J]. 王利娟,杨更亮,刘二东,刘海燕,陈义. 离子交换与吸附. 2006(02)
[8]用疏水色谱复性并同时纯化蛋白质的机理及其应用[J]. 耿信笃,白泉. 中国科学(B辑 化学). 2002(05)
[9]疏水作用色谱中流动相组成对溶质保留行为的影响[J]. 赵建国,姚丛,卫引茂,耿信笃. 色谱. 2001(06)
[10]在液-固界面上变性蛋白折叠自由能的测定[J]. 耿信笃,张静,卫引茂. 科学通报. 1999(19)
博士论文
[1]应用计量置换理论对亲水相互作用色谱中溶质保留机理的研究[D]. 王菲.西北大学 2015
[2]液固界面上蛋白质迁移规律研究[D]. 刘鹏.西北大学 2009
硕士论文
[1]二肽在反相色谱中的“静—动”保留机理[D]. 牛瑞娟.西北大学 2014
[2]在线单柱二维液相色谱从牛胰腺粗提液中快速纯化胰岛素[D]. 杨云.西北大学 2011
[3]蛋白质和芳香醇同系物在疏水色谱中保留的热力学研究[D]. 赵建国.西北大学 2002
本文编号：2927124
【文章来源】：西北大学陕西省 211工程院校
【文章页数】：119 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
色谱中QSRR的研究目标Figure1.1ResearchgoalsofQSRRinChromatography近年来，随着量子化学和计算机技术的发展，QSRR在色谱理论研究领域较为活
图 2.1 三肽的平面结构Figure 2.1 Molecular structures of tripeptides表 2.1 chemdraw 模拟 6 种三肽的结构参数*Table 2.1 Structure parameters of tripeptide from Chemdraw*peptides 3 肽-1 3 肽-2 3 肽-3 3 肽-4 3 肽-5 3 肽-6Boiling Point（K） 1103.73 1103.75 1132.71 1103.75 1103.75 1103.75Meleting Point（K） 745.30 945.30 829.02 945.30 945.30 945.30Critical Temp(K) 1120.67 1120.67 1017.76 1120.67 1120.67 1120.67Critical Pres(Bar) 37.04 37.04 35.01 37.04 37.04 37.04Critical Vol (cm3/mol) 770.50 770.50 748.50 770.50 770.50 770.50Gibbs Energy (kJ/mol) -681.70 -681.70 -751.54 -681.70 -681.70 -681.70Log P -3.23 -3.23 -2.64 -3.23 -3.23 -3.23MR (cm3/mol) 69.56 69.56 66.26 69.56 69.56 69.56Henry′s Law 27.80 27.80 24.40 27.80 27.80 27.80Heat of Form(kJ/mol) -1112.98 -1112.98 -1113.35 -1112.98 -1112.98 -1112.98
图 2.2 RPLC 中非同步进样的三肽色谱图（左）和保留时间（tR）对进样时间（ti）作图（右）Figure 2.2 The chromatograms of tripeptides with different injection time on RPLC and itscorresponding plot of retention vs sampling time色谱柱：Galaksi EF-C18M 商品柱，250×4.6 mm I.D.，粒径 5μm 粒径，孔径 120 ；流动相 A：水+0.1%TFA，流动相 B：乙腈+0.1%TFA ；流速：1.0 mL min-1；检测波长：254nm；梯度洗脱：30 min 内从 0%B-50%B；肽顺序为 A.3 肽-1; B. 3 肽-2; C.3 肽-3; D. 3 肽-4; E.3 肽-5; F. 3 肽-6.2.5.2 RPLC 中三肽迁移过程的临界迁移时间由 2.5.1 中实验发现，在三肽“停滞-迁移”保留现象中，存在一个临界迁移点将色谱过程分为两部分，肽的保留时间（tR）和进样时间（ti）作图，可明显看出整个色谱保留分成了直线部分 SR 和曲线部分 MR。因此，停滞部分 SR 与迁移部分 MR。之间肯定存在着一个临界迁移时间 (critical migration time point, TCMP），同时通过这个临界点可以计算出临界迁移浓度（critical migration concentration point，CCMP），即溶质发生迁移的浓度。在临界迁移浓度 CCMP，可以认为三肽在色谱柱上的迁移速度为 0，
【参考文献】：
期刊论文
[1]一种反相/弱阳离子交换混合模式色谱填料结合质谱在蛋白质组学中的应用[J]. 周珊珊,刘佳玉,张养军,钱小红. 中国科学:生命科学. 2018(02)
[2]混合模式色谱分离材料的研究及其应用进展[J]. 董雪芳,蔡晓明,沈爱金,魏杰,郭志谋,梁鑫淼. 色谱. 2013(04)
[3]生物大分子的混合模式色谱法——传统的色谱观点正在被改变[J]. 耿信笃. 色谱. 2012(01)
[4]弱阳离子交换色谱中疏水作用对蛋白保留的影响[J]. 孙萱,杨云,耿信笃. 分析科学学报. 2010(01)
[5]动力学因素对液相色谱分离整体蛋白的影响[J]. 闵一,陈刚,耿信笃. 色谱. 2009(05)
[6]活性蛋白液相色谱快速分离新方法[J]. 柯从玉,耿信笃. 科学通报. 2008(05)
[7]蛋白质在反相高效液相色谱梯度洗脱条件下保留时间的预测[J]. 王利娟,杨更亮,刘二东,刘海燕,陈义. 离子交换与吸附. 2006(02)
[8]用疏水色谱复性并同时纯化蛋白质的机理及其应用[J]. 耿信笃,白泉. 中国科学(B辑 化学). 2002(05)
[9]疏水作用色谱中流动相组成对溶质保留行为的影响[J]. 赵建国,姚丛,卫引茂,耿信笃. 色谱. 2001(06)
[10]在液-固界面上变性蛋白折叠自由能的测定[J]. 耿信笃,张静,卫引茂. 科学通报. 1999(19)
博士论文
[1]应用计量置换理论对亲水相互作用色谱中溶质保留机理的研究[D]. 王菲.西北大学 2015
[2]液固界面上蛋白质迁移规律研究[D]. 刘鹏.西北大学 2009
硕士论文
[1]二肽在反相色谱中的“静—动”保留机理[D]. 牛瑞娟.西北大学 2014
[2]在线单柱二维液相色谱从牛胰腺粗提液中快速纯化胰岛素[D]. 杨云.西北大学 2011
[3]蛋白质和芳香醇同系物在疏水色谱中保留的热力学研究[D]. 赵建国.西北大学 2002
本文编号：2927124
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/huaxue/2927124.html
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