基于球形核酸DNA链取代反应的端粒酶活性荧光检测

发布时间：2021-01-17 09:36

　　端粒是一种重要的生物结构,它存在于染色体的末端并且保护染色体内的生命遗传信息。但是生物体内DNA复制的缺陷导致端粒的长度随着细胞分裂次数的增加而缩短。端粒缩短到一定长度时会造成染色体之间的融合以及遗传信息的损坏,从而造成细胞的死亡。端粒酶是一种负责延长端粒的特别聚合酶,它可以把DNA复制损失的端粒长度填补起来,可以让端粒不会因细胞分裂而有所损耗,使得细胞分裂的次数增加。端粒酶存在于所有的细胞中,在正常的细胞中端粒酶活性会受到抑制并未对端粒产生保护作用。但在肿瘤细胞中,抑制作用会被减弱,从而造成细胞的无限增殖且不会凋亡。因此,正常体细胞与肿瘤细胞之间不同的端粒酶活性可以作为肿瘤标志物以及潜在的化疗靶点。端粒重复序列放大的方案（TARP）是目前最传统的端粒酶活性检测方法。该方法利用一个合成的非端粒重复DNA序列作为引物;然后,引物在端粒酶的作用下不断地延伸;最后,用聚合酶链式反应（PCR）放大延伸的产物并且通过凝胶电泳方法进行检测。但是,该方法存在着方法检测范围小且受裂解液影响较大等缺点局限其应用。本论文利用球形核酸结构（SNA）构建二种端粒酶活性检测方法。1.我们设计一种可以检测端粒酶活... 

【文章来源】：南京师范大学江苏省 211工程院校

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１．２端粒隐缩??

的六个核苷酸加在端粒或者引物的３＇端；第四步，端粒酶沿着新合成ＤＮＡ链不??断地易位并延伸端粒或者引物；端粒酶易位步骤为端粒酶携带着模板ＲＮＡ转移??到ＤＮＡ的新的３端进行新一轮端粒合成［１６］。合成的循环如图１．３所示。??因为端粒酶可以防止端粒在细胞分裂时候变短，所以端粒酶对癌细胞的无限??增殖起着至关重要的作用。在正常的细胞中端粒酶活性受到抑制并未对端粒产生??保护作用［１７］。在８５％－９０％的肿瘤细胞中端粒酶的活性没有受到抑制，从而造成??细胞的无限增殖并不会凋亡［１８］。因此，正常体细胞与肿瘤细胞之间不同的端粒??酶活性表达程度可以作为肿瘤标志物以及潜在的化疗靶点［１９１。????ｈＴＲ??????Ｔｈｅ?ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ??Ｉ??ＫＴＥＲＴ？?ｅｎｄ?ｂｉｎｄｓ?ｔｏ?ｔｈｅ??ｔｃｌｏｍｃｒａｓｅｃｏｍｐｌｅｘ??Ｒｅｉｔｅｒａｔｉｖｅ?＿????Ｔｅｌｏｍｅｒａｓｃ?ｃａｔａｌｙｚｅｓ??ａｄｄ，ｌ：ｏｎ?＾?ＩＮ?ＣＡＭＸＣＣＡＡＵｃｎｊｍ?＾ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ?ｏｆｉｈｅ??ｔｒａｎｓｌｏｃａｌ，ｏｎ?．?Ｇ－ｒｉｃｈｔｅｌｏｍｅｒｉｃ??ＣＡＡＵＣＣＣＡＡＵＣ?Ｔｈｅ?ｅｎｚｙｍｅ?ｃｏｍｐｌｅｘ??：ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｅｓ?ａｌｏｎｇ?ｉｈｅ??ｎｅｗｌｙ?ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ?ｓｉｒａｎｄ??Ｆｉｇｕｒｅ?１．３?Ｔｈｅ?ｐｒｏｃｅｓｓ?ｏｆ?ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ?ｅｘｔｅｎｄ?ＤＮＡ．ｔ，ｑ??图１．３端粒酶延伸ＤＮＡ的过程??１．２．３端粒酶活性的检测方法??在布莱克本与格雷德等先驱提出细胞内存在端粒酶以后

．匕ｔ?％公’參??Ｎ?ｃｙｃｌｅｓ，?ｓ??３：、＇?：?ｉｔ??Ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ?ＥＸＯ?ＩＩＩ?Ｓｏｌｉｄ－ｓｔａｔｅ?Ａｇ／ＡｇＣｌ?Ｐｒ．４．３?Ｉｌｌｕｓｔｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ＤＮＡ－ｍｅｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ?ｂａｓｅｄ?ｓｉｇｎａｌ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ａｓｓａｙ?ｆｏｒ?ｅ?ａｃｔｉｖｉｔｙ?ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｕｓｉｎｇ?ｅｎｚｙｍｅ－ａｓｓｉｓｔｅｄ?ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ?ｃｕｒｒｅｎｔ－ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ?ａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ?ｓｏｌｉｄ－ｓｔａｔｅ?ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ?ｐｒｏｃｅｓｓ．［２９］??于酶抑制背景电流和高特性固态电化学过程的ＤＮＡ－金属化的信号放大人端粒酶活性检测。??


本文编号：2982622