基于nano LC-LTQ/Orbitrap MS分析山羊角中蛋白质多肽类物质
发布时间：2021-02-03 18:58
基于shotgun混合蛋白质鉴定思路,研究山羊角水提液中蛋白质类、肽类物质组成。采用超高分辨的线性离子阱-静电场轨道阱质谱（LTQ/Orbitrap MS）,从山羊角水提液中大于3ku部位鉴定出52个蛋白质,从小于3ku部位鉴定出1 288个肽段,这些肽段源于46个蛋白质。鉴定出的蛋白质主要为角蛋白、胶原蛋白、角蛋白相关蛋白等结构蛋白。根据每个氨基酸出现的频次,将蛋白质上的肽段标记,绘制热图（heat map）,据此推测山羊角水提液中多肽类物质形成的过程为:从蛋白质的热区（hot regions）中经过降解、脱落、溶出,形成水提液中的各种肽段。该方法能够快速、高效地分析鉴定山羊角水提液中蛋白质肽类物质组成,可用于角类动物药蛋白质类物质组成与分析,也可为中药动物药的系统研究提供借鉴与方法参考。
【文章来源】：质谱学报. 2017,38(01)北大核心
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
图１山羊角水提液Ｆ１所有肽段中氨基酸的出现频次Ｆｉｇ．１ＦｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓｏｆｔｈｅａｍｉｎｏａｃｉｄｓｉｎａｌｌｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｐｅｐｔｉｄｅｓｉｎＦ１ｏｆＣａｐｒａｅＨｉｒｃｕｓＣｏｒｎｕ
图１山羊角水提液Ｆ１所有肽段中氨基酸的出现频次Ｆｉｇ．１ＦｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓｏｆｔｈｅａｍｉｎｏａｃｉｄｓｉｎａｌｌｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｐｅｐｔｉｄｅｓｉｎＦ１ｏｆＣａｐｒａｅＨｉｒｃｕｓＣｏｒｎｕ肽段的分子质量分布统计结果示于图２。可见，肽段的分子质量介于７１５．２７～３７６３．６３ｕ之间，其中，８１．６８％的肽段分子质量低于２０００ｕ。通常认为，肽段的分子质量低于２０００ｕ将有利于肽段透过生物屏障发挥功效［９］。图２山羊角水提液Ｆ１中所有肽段的分子质量分布Ｆｉｇ．２ＭＷｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｔｈｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｐｅｐｔｉｄｅｓｉｎＦ１ｏｆＣａｐｒａｅＨｉｒｃｕｓＣｏｒｎｕ通过ｎａｎｏＬＣ－ＭＳ／ＭＳ结合蛋白质搜库鉴定的思路，鉴定了山羊角水提液中可溶性肽段与蛋白质信息。肽段的氨基酸序列表明，这些肽段多数源于ＫＲＴ和ＫＡＰｓ，鉴定结果可在一定程度上解释山羊角水提液中肽段的形成过程。根据每个氨基酸出现的频次，将蛋白质上的肽段标记，绘制“热图（ｈｅａｔｍａｐ）”，示于图３。图中，颜色越红，表明氨基酸出现频次越高，蛋白质的这部分肽段可被认为是一个“热区（ｈｏｔｒｅｇｉｏｎｓ）”，处于热区内的氨基酸为出现频次较高的氨基酸序列，表明这些肽段的序列易于降解、脱落、溶出，最终形成提取液中的各种肽段［１０］。以角蛋白（Ｋｅｒａｔｉｎ３４，Ｅ３ＶＷ７９＿ＳＨＥＥＰ）为例，山羊角水提液中共有２２１个肽段源于该蛋白，其中１４个是唯一肽段，唯一肽段数＞２，可确定该蛋白为山羊角水提液中肽段的来源蛋白之一。肽段（Ｇ
Ｆ１中所有肽段的分子质量分布Ｆｉｇ．２ＭＷｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｔｈｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｐｅｐｔｉｄｅｓｉｎＦ１ｏｆＣａｐｒａｅＨｉｒｃｕｓＣｏｒｎｕ通过ｎａｎｏＬＣ－ＭＳ／ＭＳ结合蛋白质搜库鉴定的思路，鉴定了山羊角水提液中可溶性肽段与蛋白质信息。肽段的氨基酸序列表明，这些肽段多数源于ＫＲＴ和ＫＡＰｓ，鉴定结果可在一定程度上解释山羊角水提液中肽段的形成过程。根据每个氨基酸出现的频次，将蛋白质上的肽段标记，绘制“热图（ｈｅａｔｍａｐ）”，示于图３。图中，颜色越红，表明氨基酸出现频次越高，蛋白质的这部分肽段可被认为是一个“热区（ｈｏｔｒｅｇｉｏｎｓ）”，处于热区内的氨基酸为出现频次较高的氨基酸序列，表明这些肽段的序列易于降解、脱落、溶出，最终形成提取液中的各种肽段［１０］。以角蛋白（Ｋｅｒａｔｉｎ３４，Ｅ３ＶＷ７９＿ＳＨＥＥＰ）为例，山羊角水提液中共有２２１个肽段源于该蛋白，其中１４个是唯一肽段，唯一肽段数＞２，可确定该蛋白为山羊角水提液中肽段的来源蛋白之一。肽段（Ｇ６９－Ｒ８２）的鉴定图和肽段在Ｋｅｒａｔｉｎ３４中的分布情况示于图４。根据ＭＳ／ＭＳ图谱与蛋白质数据库比对搜库结果，确定肽段的氨基酸序列，以肽段ＧＮＥＫＥＴＭＱ－ＦＬＮＤＲ为例，ｍ／ｚ７９１．３７的主要碎片离子峰包括ｙ１＋（１７５．１２）、ｙ２＋（２９０．１５）、ｙ３＋（４０４．１９）、注：每个氨基酸的出现频次用不同颜色表示图３角蛋白Ｋｅｒａｔｉｎ３４的热图Ｆｉｇ．３ＨｅａｔｍａｐｓｏｆＫｅｒａｔｉｎ３４１
【参考文献】：
期刊论文
[1]水牛角中水溶性物质化学组成分析与鉴定[J]. 刘睿,段金廒,吴皓,刘培,尚尔鑫,钱大玮. 药学学报. 2015(05)
[2]不同工艺金振口服液药效实验比较研究[J]. 孙兰,李家春,徐连明,王振中,萧伟. 中医药导报. 2014(09)
[3]角蛋白的分子构成、提取及应用[J]. 贾如琰,何玉凤,王荣民,李芳蓉,王艳. 化学通报. 2008(04)
[4]黄羊角、山羊角、绵羊角、鹅喉羚羊角与羚羊角的镇痛及对平滑肌药理作用的比较[J]. 李凡,袁子琪. 天津中医. 1988(05)
[5]黄羊角、山羊角、绵羊角与羚羊角的药理比较试验[J]. 中成药研究. 1978(03)
[6]羚羊角、山羊角、绵羊角药理作用的初步研究[J]. 江苏医药. 1976(04)
本文编号：3017001
【文章来源】：质谱学报. 2017,38(01)北大核心
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
图１山羊角水提液Ｆ１所有肽段中氨基酸的出现频次Ｆｉｇ．１ＦｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓｏｆｔｈｅａｍｉｎｏａｃｉｄｓｉｎａｌｌｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｐｅｐｔｉｄｅｓｉｎＦ１ｏｆＣａｐｒａｅＨｉｒｃｕｓＣｏｒｎｕ
图１山羊角水提液Ｆ１所有肽段中氨基酸的出现频次Ｆｉｇ．１ＦｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓｏｆｔｈｅａｍｉｎｏａｃｉｄｓｉｎａｌｌｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｐｅｐｔｉｄｅｓｉｎＦ１ｏｆＣａｐｒａｅＨｉｒｃｕｓＣｏｒｎｕ肽段的分子质量分布统计结果示于图２。可见，肽段的分子质量介于７１５．２７～３７６３．６３ｕ之间，其中，８１．６８％的肽段分子质量低于２０００ｕ。通常认为，肽段的分子质量低于２０００ｕ将有利于肽段透过生物屏障发挥功效［９］。图２山羊角水提液Ｆ１中所有肽段的分子质量分布Ｆｉｇ．２ＭＷｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｔｈｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｐｅｐｔｉｄｅｓｉｎＦ１ｏｆＣａｐｒａｅＨｉｒｃｕｓＣｏｒｎｕ通过ｎａｎｏＬＣ－ＭＳ／ＭＳ结合蛋白质搜库鉴定的思路，鉴定了山羊角水提液中可溶性肽段与蛋白质信息。肽段的氨基酸序列表明，这些肽段多数源于ＫＲＴ和ＫＡＰｓ，鉴定结果可在一定程度上解释山羊角水提液中肽段的形成过程。根据每个氨基酸出现的频次，将蛋白质上的肽段标记，绘制“热图（ｈｅａｔｍａｐ）”，示于图３。图中，颜色越红，表明氨基酸出现频次越高，蛋白质的这部分肽段可被认为是一个“热区（ｈｏｔｒｅｇｉｏｎｓ）”，处于热区内的氨基酸为出现频次较高的氨基酸序列，表明这些肽段的序列易于降解、脱落、溶出，最终形成提取液中的各种肽段［１０］。以角蛋白（Ｋｅｒａｔｉｎ３４，Ｅ３ＶＷ７９＿ＳＨＥＥＰ）为例，山羊角水提液中共有２２１个肽段源于该蛋白，其中１４个是唯一肽段，唯一肽段数＞２，可确定该蛋白为山羊角水提液中肽段的来源蛋白之一。肽段（Ｇ
Ｆ１中所有肽段的分子质量分布Ｆｉｇ．２ＭＷｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｔｈｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｐｅｐｔｉｄｅｓｉｎＦ１ｏｆＣａｐｒａｅＨｉｒｃｕｓＣｏｒｎｕ通过ｎａｎｏＬＣ－ＭＳ／ＭＳ结合蛋白质搜库鉴定的思路，鉴定了山羊角水提液中可溶性肽段与蛋白质信息。肽段的氨基酸序列表明，这些肽段多数源于ＫＲＴ和ＫＡＰｓ，鉴定结果可在一定程度上解释山羊角水提液中肽段的形成过程。根据每个氨基酸出现的频次，将蛋白质上的肽段标记，绘制“热图（ｈｅａｔｍａｐ）”，示于图３。图中，颜色越红，表明氨基酸出现频次越高，蛋白质的这部分肽段可被认为是一个“热区（ｈｏｔｒｅｇｉｏｎｓ）”，处于热区内的氨基酸为出现频次较高的氨基酸序列，表明这些肽段的序列易于降解、脱落、溶出，最终形成提取液中的各种肽段［１０］。以角蛋白（Ｋｅｒａｔｉｎ３４，Ｅ３ＶＷ７９＿ＳＨＥＥＰ）为例，山羊角水提液中共有２２１个肽段源于该蛋白，其中１４个是唯一肽段，唯一肽段数＞２，可确定该蛋白为山羊角水提液中肽段的来源蛋白之一。肽段（Ｇ６９－Ｒ８２）的鉴定图和肽段在Ｋｅｒａｔｉｎ３４中的分布情况示于图４。根据ＭＳ／ＭＳ图谱与蛋白质数据库比对搜库结果，确定肽段的氨基酸序列，以肽段ＧＮＥＫＥＴＭＱ－ＦＬＮＤＲ为例，ｍ／ｚ７９１．３７的主要碎片离子峰包括ｙ１＋（１７５．１２）、ｙ２＋（２９０．１５）、ｙ３＋（４０４．１９）、注：每个氨基酸的出现频次用不同颜色表示图３角蛋白Ｋｅｒａｔｉｎ３４的热图Ｆｉｇ．３ＨｅａｔｍａｐｓｏｆＫｅｒａｔｉｎ３４１
【参考文献】：
期刊论文
[1]水牛角中水溶性物质化学组成分析与鉴定[J]. 刘睿,段金廒,吴皓,刘培,尚尔鑫,钱大玮. 药学学报. 2015(05)
[2]不同工艺金振口服液药效实验比较研究[J]. 孙兰,李家春,徐连明,王振中,萧伟. 中医药导报. 2014(09)
[3]角蛋白的分子构成、提取及应用[J]. 贾如琰,何玉凤,王荣民,李芳蓉,王艳. 化学通报. 2008(04)
[4]黄羊角、山羊角、绵羊角、鹅喉羚羊角与羚羊角的镇痛及对平滑肌药理作用的比较[J]. 李凡,袁子琪. 天津中医. 1988(05)
[5]黄羊角、山羊角、绵羊角与羚羊角的药理比较试验[J]. 中成药研究. 1978(03)
[6]羚羊角、山羊角、绵羊角药理作用的初步研究[J]. 江苏医药. 1976(04)
本文编号：3017001
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