流速/溶剂双梯度反相高效液相色谱法快速同时测定复方丹参片中7种有效成分

发布时间：2021-06-17 09:13

　　采用整体柱建立了流速/溶剂双梯度反相高效液相色谱法快速同时测定复方丹参片中三七皂苷R1,人参皂苷Rg1,Re,Rb1,Rd,Rb2及丹参酮ⅡA 7种有效成分。通过对溶剂和流速双梯度体系的逐步优化,并应用色谱模拟软件Dry Lab,得到分离7种成分的最佳色谱条件。采用色谱柱Merck Chromolith Performance RP-18e（100 mm×4.6 mm）,以乙腈-水为流动相体系,流速/溶剂双梯度洗脱,柱温30℃;片剂中的7种成分在21 min内达到基线分离;Rg1在60.60²42.40 mg/L（r=0.999 0）、丹参酮ⅡA在16.52⁶6.08 mg/L（r=0.999 9）,其余皂苷在30.70¹42.66 mg/L（r≥0.999 4）范围内具有良好的线性关系;定量下限（S/N=10）为21¹24μg/kg,回收率为96.7%¹00.1%。该方法能在短时间内同时分离不同极性的化合物,提高被测物的柱效,减少半峰宽和拖尾,可应用于复方丹参片中7种成分的含... 

【文章来源】：分析测试学报. 2017,36(02)北大核心CSCD

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【部分图文】：

DryLab模拟3.2mL·min－1，32%乙腈下Ｒb1，Ｒd，Ｒb2的图谱

?实际起始时间应为扣除滞留影响后的时间。滞留时间可由下式求得:tD=VD/F。因此，各阶段之间的梯度起始时间应修正提前，结果见表4。由表4可知，第一梯度若采用Mode1进行洗脱，应扣除滞后时间0.88min，修正为7.39min进行第二梯度洗脱;若采用Mode2进行洗脱，则应扣除滞后时间1.48min，修正为7.35min进行第二梯度洗脱。同理，第三梯度的实际起始洗脱时间应修正为扣除滞后时间0.88min后的14.03min。2.5流速/乙腈浓度双梯度优化分离模式的确定综合各梯度流速/乙腈浓度的优化，可得出两种分离模式下的结果，相关色谱图见图2。图2复方丹参片在两种模式下的高效液相色谱图Fig.2ChromatogramsofcompoundSalviamiltiorrhizabungetabletsindoubleacetonitrilecontent/flowgradientＲPHPLCmodes1．notoginsenosideＲ1;2．ginsenosideＲg1;3．ginsenosideＲe;4．ginsenosideＲb1;5．ginsenosideＲd;6．ginsenosideＲb2;7．tanshinoneⅡA选择4组峰对:Ｒg1与Ｒe，Ｒb1与前一杂峰，丹参酮ⅡA与前后2个杂峰，应用色谱优化函数［18］

则为末峰丹参酮ⅡA的保留时间。经计算得出Mode1COF值为0.864;Mode2COF值为0.985，大于Mode1。表明模式2的优化分离效果更好。用传统的填充柱分离7个组分需要两组不同的流动相分别进行［3］，测定方法相当繁琐、费时;而整体柱测定所有成分仅需21min，对于所有关键峰对均能达到基线分离。2.6方法学研究及复方丹参片含量测定采用最终优化的模式2，按“1.3”色谱条件进行方法学研究及片剂的含量测定。首先注入混合对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液，进行系统适用性试验，记录色谱图，供试品结果见图2Mode2，其余结果见图3。理论塔板数按三七皂苷Ｒ1计算不低于4500，7种待测物的拖尾因子不大于2，分离度均大于1.5，主峰峰面积的重复性ＲSD均小于2%，阴性对照溶液未见干扰。通过精密吸取不同体积的工作对照品溶液进行测定，以峰面积(y)对进样质量(x，μg)进行线性回归，求得7种待测物的线性方程;根据样品信号与噪音信号比(S/N)为10计算定量下限(LOQ)为0.021～0.124μg/kg;称取供试品0.5g(精确至0.001g)至50mL棕色量瓶中，加入混合对照品溶液适量，配制低、中、高3个质量浓度，按“1.2.2”方法平行制备6份样品溶液，按“1.3”条件测定分析，分别得出7种待测组分的平均加样回收率96.7%～100.1%(表5)，ＲSD(n=6)为0.63%～1.4%，表明本方法的准确度和精密度良好。图3复方丹参片的HPLC系统适用性图谱Fig.3ChromatogramsofsystemsuitabilityofcompoundSalviamiltiorrhizabungetabletsA．mixedreference，B．lackingsalviamiltiorrhizanotoginseng，C．lackingsalviamiltiorrhiza，D．lackingnotoginseng;thenumber(1－6)denotedwasthesameasthatinFig.2表57种待测组分的方法学参数测定和复方丹参片有效成分的测定结果Table5Analyticalperformancepa

【参考文献】：
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本文编号：3234913