柱前衍生-高效液相色谱法测定L-（-）-岩藻糖含量

发布时间：2021-10-08 14:16

　　目的采用对氨基苯甲酸乙酯（p-ABBE）为衍生剂,建立L-（-）-岩藻糖含量测定的柱前衍生-高效液相色谱法。方法对L-（-）-岩藻糖样品与p-ABBE的衍生比例、衍生温度、衍生时间等衍生条件进行优化,同时进行色谱柱、流动相等高效液相色谱条件的优化。结果衍生化条件为:衍生化试剂（p-ABEE）和L-（-）-岩藻糖的摩尔比为7∶1,衍生温度为85℃,反应时间为1. 5 h;色谱条件为:色谱柱Agilent 5 TC-C₁₈（2）（250 mm×4. 6 mm,5μm）,流动相为0. 02%TFA-乙腈（77∶23,V/V）,流速为1. 0 ml/min,检测波长为307 nm。本方法在0. 50 mmol/L～6. 02 mmol/L浓度与峰面积呈现良好的线性关系（r=0. 999 5）,定量限（S/N=10）及检出限（S/N=3）分别为0. 20 ng/ml和0. 10 ng/ml;平均加标回收率为82. 94%,RSD为1. 74%。结论本方法操作简便、结果准确、实用性强,能够用于L-（-）-岩藻糖的含量测定。 

【文章来源】：中国卫生检验杂志. 2020,30(07)

【文章页数】：3 页

【部分图文】：

p-ABBE柱前衍生法测定L-(-)-岩藻糖的反应原理

L-(-)-岩藻糖是6-脱氧半乳糖，结构与2-去氧葡萄糖结构类似，因此首先参考柱前衍生-ABBE法测定2-去氧葡萄糖的色谱条件:Thermo ODS(250 mm×4.6 mm,5μm)，流动相:0.02%TFA/乙腈=80∶20，流速:1.00 ml/min，柱温:35℃;紫外检测波长:307 nm[15]。试验结果表明采用此色谱条件，L-(-)-岩藻糖主峰跟杂峰分离度不是很好，因此改变流动相比例(乙腈的比例75%～85%)，进一步考察样品主峰与杂质峰的分离效果。试验结果表明，其他色谱条件不变，流动相比例在77∶23(水相/有机相，V/V)时，主峰与杂峰分离效果较好。同时本文考察了不同型号色谱柱[Thermo ODS2(250 mm×4.6 mm,5μm)、Agilent SB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)、Agilent TC-C18(2)(250 mm×4.6 mm,5μm)]对衍生后L-(-)-岩藻糖主峰与杂质峰的分离效果。试验结果表明，在相同的色谱条件下，Agilent TC-C18(2)对主峰及杂质峰的分离效果最佳(图2、图3)。图3 Agilent TC-C18(2)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱上的L-(-)-岩藻糖和空白样品色谱图

Agilent TC-C18(2)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱上的L-(-)-岩藻糖和空白样品色谱图

【参考文献】：
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本文编号：3424328