纳豆激酶的酶学特性及其微胶囊的制备研究

发布时间：2017-05-08 07:07

  本文关键词：纳豆激酶的酶学特性及其微胶囊的制备研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：纳豆激酶是由枯草芽孢杆菌产生的一种丝氨酸蛋白酶,它主要的功能是溶解血栓,也作为新一代的溶栓药物得到相应的发展与研究。本文主要对纳豆激酶的酶学特性以及海藻酸钠对其包埋制备微胶囊的工艺优化以及微胶囊稳定性的研究。采用SDS-PAGE法以及Zeta电位法分别测得纳豆激酶的分子量为28 k Da以及等电点为8.58。采用纤维蛋白-琼脂糖平板法测定纳豆激酶的酶活,得到纳豆激酶的酶活为62520 U/g。纳豆激酶在不同的加热温度时,温度越高,其酶活越低。在p H 6.5的缓冲溶液中,纳豆激酶的相对酶活为最高。在40℃的水浴中,保温不同的时间,纳豆激酶在保温60 min时,达到最高的酶活。Na Cl在浓度低于1.35 mol/L时,对纳豆激酶的酶活起到促进作用,但是高于此浓度时,纳豆激酶的酶活明显的受到了抑制;Mg2+、Ca2+对纳豆激酶有促进作用;Cu2+、Zn2+对纳豆激酶的活性有抑制作用;Fe2+对纳豆激酶的抑制作用,即使在较低的浓度时对纳豆激酶的酶活稳定性的抑制作用也十分的明显。使用海藻酸钠包埋纳豆激酶制备微胶囊的单因素最佳工艺条件是:海藻酸钠的浓度为1.60%,羧甲基纤维素钠的浓度为0.50%,Ca Cl2浓度为0.30%。正交实验所得的最佳工艺条件是:海藻酸钠的浓度为1.80%,羧甲基纤维素钠的浓度为0.50%,Ca Cl2浓度为0.30%。对包埋的纳豆激酶与游离状态下的纳豆激酶酶学性质的比较,在不同的温度以及不同的p H下,包埋的纳豆激酶比游离的纳豆激酶的相对酶活要高。并且在酶活温度为50℃时,游离的纳豆激酶的相对酶活是51.69%,包埋的纳豆激酶的相对酶活为71.67%;在p H 8.5的条件下,游离的纳豆激酶的相对酶活是38.09%,包埋纳豆激酶的相对酶活是55.99%。经过包埋的纳豆激酶,其酶活受到了一定程度的保护。因此,经过海藻酸钠包埋的纳豆激酶可以较好的保护酶的活性,免受外界环境的影响。同样,关于混合多糖的研究发现,海藻酸钠/CMC包埋的纳豆激酶,有以下优点:粒径小、外观规则并且酶活的回收率高、硬度强。
【关键词】：纳豆激酶 海藻酸钠 微胶囊
【学位授予单位】：哈尔滨工业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：O629.8
【目录】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-10
• 第1章 绪论10-22
• 1.1 课题的研究背景及目的意义10
• 1.2 纳豆激酶的研究及进展10-16
• 1.2.1 纳豆激酶的来源—纳豆10-11
• 1.2.2 纳豆激酶性质11-12
• 1.2.3 纳豆激酶的作用机理12
• 1.2.4 纳豆激酶的应用12-13
• 1.2.5 纳豆激酶酶活的测定方法13-14
• 1.2.6 纳豆激酶的研究现状14-16
• 1.3 微胶囊的研究及进展16-20
• 1.3.1 微胶囊的定义及发展16
• 1.3.2 微胶囊的目的和意义16-17
• 1.3.3 微胶囊的壁材17-18
• 1.3.4 微胶囊的方法18-19
• 1.3.5 微胶囊的研究现状19-20
• 1.4 本课题的主要研究内容20-22
• 1.4.1 技术路线20
• 1.4.2 纳豆激酶的酶学特性的研究20-21
• 1.4.3 海藻酸钠/CMC包埋纳豆激酶的研究21-22
• 第2章 材料与方法22-32
• 2.1 实验材料及仪器22-24
• 2.1.1 实验试剂22-23
• 2.1.2 实验设备23-24
• 2.2 实验方法24-31
• 2.2.1 纳豆激酶的酶学特性研究24-25
• 2.2.2 纳豆激酶的酶学特性25-28
• 2.2.3 海藻酸钠/CMC包埋纳豆激酶的研究28-29
• 2.2.4 海藻酸钠/CMC包埋物的稳定性研究29-30
• 2.2.5 混合多糖包埋纳豆激酶的比较30-31
• 2.3 数据分析31-32
• 第3章 纳豆激酶的酶学特性研究32-43
• 3.1 纳豆激酶的基础性质研究32-35
• 3.1.1 纳豆激酶的分子量32-33
• 3.1.2 纳豆激酶的等电点33-34
• 3.1.3 纳豆激酶的酶活34-35
• 3.2 纳豆激酶的酶学特性35-41
• 3.2.1 纳豆激酶的最适反应温度35-37
• 3.2.2 纳豆激酶的最适反应pH37-38
• 3.2.3 纳豆激酶的保温时间稳定性38-39
• 3.2.4 NaCl浓度对纳豆激酶酶活稳定性的影响39-40
• 3.2.5 金属离子对纳豆激酶酶活稳定性的影响40-41
• 3.3 本章小结41-43
• 第4章 海藻酸钠/CMC包埋纳豆激酶的研究43-62
• 4.1 BCA试剂盒测定蛋白含量的标准曲线43-44
• 4.2 海藻酸钠/CMC包埋纳豆激酶的单因素实验44-51
• 4.2.1 海藻酸钠浓度对包埋纳豆激酶的影响44-47
• 4.2.2 羧甲基纤维素钠浓度对包埋纳豆激酶的影响47-49
• 4.2.3 CaCl2 浓度对包埋纳豆激酶的影响49-51
• 4.3 海藻酸钠/CMC包埋纳豆激酶的正交实验51-54
• 4.3.1 正交实验因素及实验结果51-53
• 4.3.2 正交实验结果的极差分析53-54
• 4.4 海藻酸钠/CMC包埋物稳定性研究54-57
• 4.4.1 温度对海藻酸钠/CMC包埋物稳定性的影响54-55
• 4.4.2 pH对海藻酸钠/CMC包埋物稳定性的影响55-56
• 4.4.3 海藻酸钠/CMC包埋物的储存稳定性56-57
• 4.5 混合多糖制备纳豆激酶微胶囊的比较57-60
• 4.5.1 混合多糖包埋纳豆激酶的颗粒大小比较57-58
• 4.5.2 混合多糖包埋纳豆激酶的形态的观察58-60
• 4.5.3 混合多糖包埋纳豆激酶的酶活大小的比较60
• 4.6 本章小结60-62
• 结论62-63
• 参考文献63-70
• 攻读硕士期间发表的学术论文70-72
• 致谢72

【参考文献】

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