基于脑微透析技术的丹红注射液抗脑缺血药效学研究

发布时间：2017-05-09 16:00

  本文关键词：基于脑微透析技术的丹红注射液抗脑缺血药效学研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：建立同时测定丹红注射液中丹参素、原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、丹酚酸B和丹酚酸A含量的HPLC-DAD(高效液相色谱-二极管阵列检测器)方法,运用UV-VIS(紫外-可见分光光度法)检测丹红注射液中有效部位(总黄酮)的含量。建立同时测定丹红提取液中三种有效成分(丹参素、羟基红花黄色素A、迷迭香酸)含量的高效液相色谱法。以丹红为模型药物,对微透析技术应用于中药复方药动学研究进行探索。建立同时测定大鼠脑脊液中三种氨基酸的方法(Asp、Glu和GABA)含量的高效液相色谱方法。通过测定脑缺血大鼠脑内氨基酸水平动态变化对丹红注射液药效学研究。 方法：(1)6种有效成分的定量采用Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6×150mm,5μm)；乙腈-0.1%磷酸水流动相；流速1.0mL·min-1；波长330nm、280nm；柱温30℃。有效部位以芦丁为对照品,UV-VIS法进行测定。(2)利用微透析法获得透析液,HPLC-DAD梯度洗脱测定透析液中待测成分含量,计算丹红体外回收率,考察丹参素、HSYA、迷迭香酸在丹参提取液、红花提取液和丹红提取液透析媒介中回收率变化情况,并考察浓度、流速对回收率的影响。(3)测定大鼠脑脊液中氨基酸含量的方法建立。大脑中动脉栓塞(MCAO)60min建立大鼠局部脑缺血模型。丹红组在缺血前10min尾静脉注射丹红注射液2mL,用脑微透析仪收集缺血前后和再灌注过程海马区的细胞外液,测定氨基酸含量变化。 结果：(1)样品中6种成分良好分离,线性关系良好(R0.999,n=6),；平均加样回收率分别为98.98%,100.86%,100.44%,98.73%,101.35%,100.17%。10批丹红注射液每1mL含6种有效成分的总量11.50mg；总黄酮9.00mg。(2)3种待测成分在30min内达到良好分离,线性关系良好(R0.999,n=6)。当灌流速度为1.0μL·min-1时,混合标准液中丹参素钠、HSYA、迷迭香酸的回收率依次为11.05%,5.81%,6.73%,随着透析媒介中物质数量的增多,特定成分的回收率有下降趋势,在相同浓度下回收率随流速增大而减少,但与透析媒介中该成分的浓度无关。(3)脑局部缺血后,氨基酸类神经递质均会有一定程度的升高,在造模后30min左右达到峰值,然后逐渐下降。与模型组比较,尾静脉给药后,Asp、Glu升高幅度有降低,GABA升高的幅度有所增加。 结论：(1)该方法操作简单,结果准确,具有较好的重复性和稳定性,可为丹红注射液的质量控制提供参考。微透析技术可以用于丹参红花复方药动学研究。(2)文中建立的HPLC-DAD可作为微透析研究中丹红回收率的测定方法。微透析实验应考虑影响回收率因素,选择合适的实验条件,以方便微透析检测。(3)丹红注射液对脑缺血具有一定的保护作用。
【关键词】：丹红注射液 高效液相色谱-二极管阵列检测器 总黄酮 中药复方 脑微透析 脑缺血 氨基酸神经递质
【学位授予单位】：浙江中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R285.5;O657.72
【目录】：

• 目录3-5
• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-9
• 前言9-12
• 第一部分 丹红注射液有效成分和有效部位的质量控制研究12-24
• 一、实验材料与方法12-18
• (一) 实验药品与试剂12-13
• (二) 实验仪器与设备13
• (三) 实验方法13-18
• 二、结果18-21
• (一) HPLC-DAD测定丹红注射液中有效成分含量18-21
• (二) UV-VIS测定丹红注射液中总黄酮有效部位含量21
• 三、分析与讨论21-23
• (一) 检测波长的选择21-22
• (二) 流动相的选择22
• (三) 样品的稳定性22
• (四) 含量测定结果的分析22-23
• (五) 有效部位与有效成分的质量控制23
• 四、小结23-24
• 第二部分 丹参红花微透析回收率的体外测定及影响因素24-37
• 一、实验材料与方法24-31
• (一) 实验药品与试剂24
• (二) 实验仪器与设备24-25
• (三) 实验方法25-31
• 二、结果31-35
• (一) 丹参红花微透析回收率的体外测定方法建立31-32
• (二) 体外微透析实验32-35
• 三、分析与讨论35-36
• (一) 检测波长的选择35
• (二) 微透析用于复方药35
• (三) 微透析回收率影响因素35-36
• 四、小结36-37
• 第三部分 丹红注射液对脑部微透析药效学37-52
• 一、实验材料与方法37-45
• (一) 实验药品与试剂37
• (二) 实验仪器与设备37-38
• (三) 实验动物38
• (四) 实验方法38-45
• 二、结果45-49
• (一) 测定大鼠脑脊液中氨基酸含量的方法建立45-46
• (二) 丹红注射液对脑缺血诱导的大鼠脑内氨基酸水平动态变化的影响46-49
• 三、分析与讨论49-51
• 四、小结51-52
• 结论52-53
• 参考文献53-56
• 致谢56-57
• 文献综述57-66
• 参考文献65-66

【参考文献】

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本文编号：352779