[C 4 mim]BF 4 、[C 4 Py]Cl离子液体与木瓜蛋白酶相互作用的荧光光谱分析和分子对接

发布时间：2022-01-20 10:28

　　离子液体双水相提取木瓜蛋白酶有较高的提取率和简便的操作流程,构建合适的离子液体双水相是提取木瓜蛋白酶的研究热点。鉴于此,本实验通过荧光光谱分析、分子对接和离子液体双水相体系分配系数测定等方法,研究离子液体与木瓜蛋白酶相互作用的机制。荧光光谱分析结果表明,在疏水作用力驱动下1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐（[C₄mim]BF₄）和1-丁基氯化吡啶（[C₄Py]Cl）离子液体可与木瓜蛋白酶发生静态荧光猝灭,结合生成复合物,结合位点数均为1,且[C₄Py]Cl离子液体的吉布斯自由能高于[C₄mim]BF₄离子液体。分子对接结果进一步表明,离子液体的结合部位位于木瓜蛋白酶中间活性区域的疏水凹槽中,并与周围众多的氨基酸残基存在疏水作用、范德华力和π-π相互作用等非共价键力。离子液体双水相体系分配系数测定结果表明,在实际萃取木瓜蛋白酶的过程中,相同条件下[C₄Py]Cl离子液体的萃取效果优于[C₄mim]BF₄

【文章来源】：食品科学. 2020,41(23)北大核心EICSCD

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【部分图文】：

离子液体与木瓜蛋白酶分子对接结果

荧光光谱法是在接近实际萃取环境下研究活性小分子与酶间相互作用应用最广泛的方法，其基于小分子引起的酶蛋白内源荧光光谱变化来获得二者的结合常数、结合位点数及热力学参数等信息[20-21]。由图1可知，随着离子液体溶液添加量的增加，木瓜蛋白酶的荧光强度呈规律性降低，表明二者发生了相互作用。采用Stern-Volmer方程（公式（1））分析不同温度下的荧光光谱最大吸收波长（表1），获得相应的猝灭常数（表2）。不同温度下的猝灭常数（Kq）均大于生物大分子动态荧光猝灭的最大常数2×1010 L/（mol·s），表明离子液体通过与木瓜蛋白酶结合成复合物，引发了酶蛋白的静态荧光猝灭[22]。图1 离子液体在不同温度下对木瓜蛋白酶荧光光谱的影响

图1 离子液体在不同温度下对木瓜蛋白酶荧光光谱的影响对于静态荧光猝灭过程，可以使用双对数方程（公式（2））计算离子液体与木瓜蛋白酶相互作用过程的结合常数（Ka）和结合位点数（n），相关结果见表3。

【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
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硕士论文
[1]四种头孢类药物与木瓜蛋白酶间相互作用的荧光光谱法研究[D]. 陈丽.河北大学 2018
[2]木瓜蛋白酶的双水相分离纯化、原位固定化及其应用研究[D]. 李明亮.华东理工大学 2011



本文编号：3598660