化学衍生-LC-MS分析猪血浆中胺类代谢物的研究

发布时间：2022-08-07 19:04

　　多种胺类物质参与的蛋氨酸循环是有助于许多哺乳动物健康的主要途径之一,其在动物体内的多种代谢途径相互之间有协同和竞争的关系,并影响其相应的生物学功能,但关于蛋氨酸循环的具体代谢机制及生理作用的解释尚不完整。通过对参与蛋氨酸循环代谢物质的检测,可以了解该代谢过程,更深层次的理解胺类代谢物在生命活动中的作用和机制。主要内容如下:（1）LC-MS是测定胺类代谢物的重要分析技术之一,但由于胺类的高极性、高水溶性及碱性等特点,使得难以在反相色谱柱中保留,离子抑制效应严重。为了改善色谱分离及提高灵敏度,利用化学衍生结合LC-MS对胺类物质进行定量分析。本文选取丹磺酰氯为衍生化试剂,考察了最佳衍生条件:p H为9.0,温度40°C,反应20min,不需要催化剂。在此条件下的衍生效率接近100%。通过色谱及质谱行为得知:衍生后引入疏水基团有利于色谱分离,引入易质子化基团易产生共同碎片离子。衍生后的灵敏度提高了1-3个数量级,衍生产物能在4°C下稳定保存3天。（2）血浆中复杂的基质对胺类的检测造成了极大干扰。因此,建立了稳定同位素结合LC-MS测定胺类代谢物的新方法。以丹磺酰氯和氘代丹磺酰氯作为一组同位素... 

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
缩略语表
第一章 绪论
    1 胺类代谢物概况
        1.1 胺类代谢物的生理功能及检测意义
        1.2 胺类代谢物检测技术研究进展
    2 衍生技术研究进展
        2.1 衍生技术概述
        2.2 衍生化试剂
            2.2.1 硅烷化试剂
            2.2.2 酰基化试剂
            2.2.3 烷基化试剂
            2.2.4 其它衍生试剂
        2.3 衍生技术应用进展
            2.3.1 衍生技术在环境分析中的应用
            2.3.2 衍生技术在食品分析中的应用
            2.3.3 衍生技术在生物分析中的应用
    3 质谱分析技术
        3.1 质谱分析技术简介
        3.2 三重四级杆质谱仪
        3.3 衍生化质谱技术
        3.4 稳定同位素标记质谱技术
    4 选题依据及研究内容
        4.1 选题依据
        4.2 研究内容
第二章 胺类代谢物衍生方法的建立
    1 引言
    2 实验部分
        2.1 试剂
        2.2 仪器
        2.3 实验方法
            2.3.1 样品制备
            2.3.2 衍生反应
            2.3.3 数据采集
    3 结果与讨论
        3.1 衍生条件的优化
            3.1.1 时间对衍生反应的影响
            3.1.2 温度对衍生反应的影响
            3.1.3 pH对衍生反应的影响
            3.1.4 催化剂对衍生反应的影响
        3.2 衍生化产物质谱碎裂行为比较
        3.3 衍生化产物色谱行为比较
        3.4 衍生与未衍生灵敏度的比较
        3.5 衍生效率
        3.6 衍生化产物的稳定性
    4 小结
第三章 猪血浆中蛋氨酸循环代谢物的检测
    1 引言
    2 实验部分
        2.1 试剂
        2.2 仪器
        2.3 实验方法
            2.3.1 氘代丹磺酰氯的合成
            2.3.2 猪血浆样品的前处理
            2.3.3 数据采集
    3 结果与讨论
        3.1 DNS-Cl/d6-DNS-Cl的合成
        3.2 猪血浆样品中衍生条件的优化
            3.2.1 猪血浆前处理条件的优化
            3.2.2 还原剂TCEP浓度的优化
            3.2.3 丹磺酰氯浓度的优化
        3.3 猪血浆样品中的色谱行为比较
        3.4 方法学考察
        3.5 猪血浆中不同蛋氨酸水平对其相关代谢物水平的影响分析
    4 小结
结论与展望
    1 总结
    2 展望
参考文献
学术成果
致谢



本文编号：3670875