高效液相色谱—串联质谱法检测多种贝类毒素研究

发布时间：2017-05-17 10:26

  本文关键词：高效液相色谱—串联质谱法检测多种贝类毒素研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：近年来，随着各国沿海水产养殖业的迅速发展，海洋环境问题也日趋严重，赤潮频发，沿海地区人类食用海洋贝类中毒患病事件一直呈上升态势。贝类毒素毒性大、反应快、且无适宜解毒剂，具有突发性和广泛性，故水产品的安全问题直接关系到消费者的身体健康和生命安全。为此，各国政府对贝类的生物毒素污染问题越来越重视，，许多国家相继对贝毒的检测方法进行了许多研究。但目前我国对贝毒的检测分析能力还相对较弱，一些新的检测分析技术，如液-质联用技术等在贝毒检测分析方面的应用较少。然而液-质联用技术自身的技术特点使得其在贝毒检测分析方面具有巨大的应用潜力，因此，本文尝试应用高效液相色谱-三重串联四级杆质谱（HPLC-MS/MS）技术建立分析检测腹泻性贝毒（diarrhetic shellfish poisoning, DSP）、麻痹性贝毒（paralytic shellfish poisoning,PSP）、记忆缺失性贝毒（acids shellfish poisoning, ASP）三类贝毒的方法，并利用所建立的方法对实际样品中的贝毒残留量进行分析测定。 论文主要包括三个部分： 1、HPLC-MS/MS分析水产品中腹泻性贝类毒素残留 对样品前处理及净化条件、色谱及质谱条件进行了研究和优化，建立了一种专属、灵敏的HPLC-MS/MS法检测水产品中腹泻性贝类毒素残留的分析方法。具体方法为：用甲醇-水（80/20, V/V）溶液作为提取溶剂，超声提取目标化合物，离心后的上清液使用Waters OASIS HLB固相萃取柱净化、氮气吹干、定容、过膜后上机测定。在优化的色谱分离条件及质谱分析条件下，五种腹泻性贝毒在浓度10.0~160.0μg/L内线性关系良好（R2＞0.998）。在添加浓度2.0~200.0μg/kg水平下，五种腹泻性贝毒的平均回收率在60.7%~94.0%之间，变异系数在2.0%~6.0%之间，GYM、SPX1、PTX2、OA、AZA1五种腹泻性贝毒的检出限分别为0.2μg/kg、0.1μg/kg、1.0μg/kg、0.1μg/kg、0.2μg/kg。 2、HPLC-MS/MS分析水产品中麻痹性贝类毒素残留 对样品前处理及净化条件、色谱及质谱条件进行了研究和优化，确定了GTX23-c、GTX14-c、dcGTX23-b、C12、NEO-c和GTX5-b六种麻痹性贝毒的色谱质谱分析条件，并分别建立了HPLC-MS/MS法检测水产品中麻痹性贝类毒素dc-STX和STX-e残留的分析方法。具体方法为：用0.1mol/L的HCl溶液作为提取溶剂，100℃水浴加热提取目标化合物，离心后的上清液使用WatersOASIS HLB固相萃取柱净化、过膜后上机测定。在优化的色谱分离条件及质谱分析条件下，两种麻痹性贝毒在浓度10.0~500.0μg/L内线性关系良好（R2＞0.998）。dc-STX在添加浓度50.0~500.0μg/kg水平下，平均回收率在53.4%~62.5%之间，变异系数在2.5%~4.6%之间；STX-e在添加浓度50.0~300.0μg/kg水平下，平均回收率在59.8%~68.0%之间，变异系数在1.6%~2.4%之间。dc-STX和STX-e的检出限分别为20.0μg/kg和30.0μg/kg。 3、HPLC-MS/MS分析水产品中记忆缺失性贝类毒素残留 对样品前处理及净化条件、色谱及质谱条件进行了研究和优化，建立了一种专属、灵敏的HPLC-MS/MS法检测水产品中记忆缺失性贝类毒素DA-f残留的分析方法。具体方法为：用甲醇-水（50/50, V/V）溶液作为提取溶剂，超声提取目标化合物，离心后的上清液使用Supelclean LC-SAX固相萃取柱净化、过膜后上机测定。在优化的色谱分离条件及质谱分析条件下，DA-f在浓度20.0~1000.0μg/L内线性关系良好（R2＞0.999）。在添加浓度20.0~100.0μg/kg水平下，DA-f的平均回收率在71.3%~84.1%之间，变异系数在4.4%~4.6%之间，DA-f的检出限为5.0μg/kg。 4、实际样品中DSP、PSP、ASP三类贝毒残量检测 将本研究所建立的方法应用于东港出入境检验检疫中心2012年度的海洋毒素检测工作中。以建立的高灵敏度、低检出限的方法为基础依据，对此次抽检紫石房蛤、文蛤、青蛤、杂色蛤、贻贝等样品中DSP、PSP、ASP三类贝毒的残留量进行了测定。共检测三批，均有不同程度的检出，但含量也均远远低于标准限量，样品检测合格率为100％。本研究为我国贝类及其产品中贝毒的检测分析提供了具体的方法和技术规范，具有重要的理论研究价值和实际应用前景。
【关键词】：高效液相色谱-串联质谱 贝类毒素 水产品 定性定量分析
【学位授予单位】：辽宁大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：TS254.7;O657.7
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-15
• 引言15-34
• 0.1 贝类毒素概述15-24
• 0.1.1 腹泻性贝毒15-19
• 0.1.2 麻痹性贝毒19-21
• 0.1.3 记忆缺失性贝毒21-22
• 0.1.4 神经性贝毒22
• 0.1.5 西加鱼毒素22-23
• 0.1.6 氨代螺旋酸贝毒23-24
• 0.2 贝类毒素检测分析方法研究进展24-30
• 0.2.1 生物检测分析方法24-25
• 0.2.2 生物化学检测分析方法25-27
• 0.2.3 化学仪器分析法27-30
• 0.3 检测分析技术的未来发展趋势30
• 0.4 各国对贝类毒素残留限量的要求30-31
• 0.5 本课题的研究目的、内容和特色31-34
• 0.5.1 本研究的目的及意义31-32
• 0.5.2 本研究的内容及技术路线32-34
• 第1章 液质联用分析腹泻性贝毒方法的研究34-51
• 1.1 引言34
• 1.2 实验部分34-39
• 1.2.1 仪器和试剂34-36
• 1.2.2 标准储备液和流动相的配置36-37
• 1.2.3 样品的处理及净化37-38
• 1.2.4 色谱和质谱条件38
• 1.2.5 制作标准曲线38
• 1.2.6 定性定量方法38-39
• 1.2.7 回收率、精密度和检出限39
• 1.3 结果和讨论39-50
• 1.3.1 提取及净化条件的选择39-42
• 1.3.2 色谱条件的选择及质谱分析42-47
• 1.3.3 方法线性47-48
• 1.3.4 回收率与精密度48-49
• 1.3.5 最低检测限49-50
• 1.4 水产品中 DSPs 残留的检测50-51
• 第2章 液质联用分析麻痹性贝毒方法的研究51-67
• 2.1 引言51
• 2.2 实验部分51-57
• 2.2.1 仪器和试剂51-54
• 2.2.2 标准储备液和流动相的配置54
• 2.2.3 样品的处理及净化54-55
• 2.2.4 色谱和质谱条件55-56
• 2.2.5 制作标准曲线56
• 2.2.6 定性定量方法56-57
• 2.2.7 添加标准物质求回收率和精密度实验57
• 2.3 结果和讨论57-66
• 2.3.1 提取及净化条件的选择57-58
• 2.3.2 色谱条件的选择及质谱分析58-63
• 2.3.3 方法线性63-65
• 2.3.4 回收率与精密度65-66
• 2.3.5 最低检测限66
• 2.4 水产品中 PSPs 残留的检测66-67
• 第3章 液质联用分析记忆缺失性贝毒方法的研究67-79
• 3.1 引言67
• 3.2 实验部分67-72
• 3.2.1 仪器和试剂67-69
• 3.2.2 标准储备液和流动相的配置69
• 3.2.3 样品的处理及净化69-70
• 3.2.4 色谱和质谱条件70-71
• 3.2.5 制作标准曲线71
• 3.2.6 定性定量方法71
• 3.2.7 添加标准物质求回收率和精密度实验71-72
• 3.3 结果和讨论72-78
• 3.3.1 提取及净化条件的选择72-73
• 3.3.2 色谱条件的选择及质谱分析73-76
• 3.3.3 方法线性76-77
• 3.3.4 回收率与精密度77-78
• 3.3.5 最低检测限78
• 3.4 水产品中 ASP 残留的检测78-79
• 第4章 总结与展望79-82
• 4.1 总结79-81
• 4.2 展望81-82
• 致谢82-83
• 参考文献83-88
• 附录88-89
• 攻读学位期间发表的学术论文以及参加科研情况89-90
• 一、发表论文89
• 二、参与科研情况89-90

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前8条

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  本文关键词：高效液相色谱—串联质谱法检测多种贝类毒素研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：373177