α-Synuclein在线粒体中的原位核磁共振研究

发布时间：2023-03-04 19:51

　　α-突触核蛋白(α-Synuclein)是一种由140个氨基酸残基组成的天然无结构蛋白,其聚集物是帕金森综合征病理标志物——路易小体的主要成分。因此,α-突触核蛋白被认为与帕金森综合症的发病机制密切相关,引起广泛关注并成为研究热点。线粒体是一种由两层膜结构包被的真核细胞器,它是细胞呼吸作用通过氧化磷酸化合成三磷酸腺苷(ATP)的主要场所,能提供细胞生理活动所需的能量,也被称为细胞的“Power House”。同时,线粒体还参与了其他诸多细胞进程,如细胞间的信息传递、细胞分化和细胞凋亡。线粒体功能异常则与多种疾病相关,如癌症、衰老、炎症、神经退行性疾病等,其中就包括帕金森综合症。据统计全球约有500万帕金森病患者,大量科学家致力于研究该疾病的发病机理并研发有效的治疗方法,而研究α-突触核蛋白与线粒体膜的相互作用,以及在线粒体中开展α-突触核蛋白的原位研究是了解该疾病发病机制的重要途径,对于疾病的认识与治疗具有重要意义。另外,随着蛋白质科学研究的发展与深入,科学家们越来越关注蛋白质在其发挥功能的细胞乃至亚细胞中的表现与功能,在线粒体中展开蛋白质的原位研究也可以为未来蛋白质研究提供一种新方法...

【文章页数】：105 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 绪论
    1.1 突触核蛋白α-Synuclein简介
        1.1.1 蛋白质的基本结构
        1.1.2 天然无结构蛋白的存在
        1.1.3 α-Synuclein为天然无结构蛋白
        1.1.4 α-Synuclein与帕金森综合征
        1.1.5 α-Synuclein与线粒体功能异常
    1.2 线粒体简介
        1.2.1 线粒体结构
        1.2.2 线粒体功能
        1.2.3 线粒体功能异常与疾病
        1.2.4 线粒体功能异常与帕金森综合征
    1.3 生物大分子核磁共振
        1.3.1 核磁共振基本原理
        1.3.2 化学位移的介绍
        1.3.3 蛋白质核磁共振
        1.3.4 二维核磁共振
        1.3.5 细胞内的蛋白质核磁共振
    1.4 研究内容及意义
第2章 大鼠肝脏线粒体的提取
    2.1 引言
    2.2 材料与方法
        2.2.1 实验材料
        2.2.2 线粒体的提取
        2.2.3 线粒体纯度检测
        2.2.4 线粒体完整性检测
    2.3 结果与讨论
        2.3.1 线粒体纯度检测结果
        2.3.2 线粒体完整性检测结果
    2.4 小结
第3章 利用电穿孔方法将α-Synuclein导入线粒体
    3.1 引言
    3.2 材料与方法
        3.2.1 实验材料
        3.2.2 α-Synuclein的表达纯化及检测
        3.2.3 α-Synuclein电转线粒体实验
        3.2.4 电转效果的核磁检测
        3.2.5 线粒体内源性α-Synuclein的检测
        3.2.6 电穿孔对线粒体影响的检测
        3.2.7 α-Synuclein的主链氨基酸归属
    3.3 结果与讨论
        3.3.1 α-Synuclein的纯化结果分析
        3.3.2 α-Synuclein的主链归属
        3.3.3 线粒体背景信号的核磁检测结果
        3.3.4 电穿孔对线粒体影响的检测结果
        3.3.5 电转实验的核磁检测
    3.4 小结
第4章 多种标记方法在该研究中的应用
    4.1 引言
    4.2 材料与方法
        4.2.1 实验材料
        4.2.2 ¹⁹F标记α-Synuclein电转线粒体实验
        4.2.3 ¹³C-¹⁵N标记α-Synuclein电转线粒体实验
    4.3 结果与讨论
        4.3.1 α-Synuclein在线粒体内的¹⁹F谱图
        4.3.2 α-Synuclein在线粒体内的C-H相关谱图
        4.3.3 α-Synuclein在线粒体内的C-N相关谱图
    4.4 小结
第5章 α-Synuclein与线粒体相科学关问题探究
    5.1 引言
    5.2 材料与方法
        5.2.1 实验材料
        5.2.2 α-Synuclein与完整线粒体相互作用的检测
        5.2.3 线粒体内α-Synuclein的谱图分析
        5.2.4 α-Synuclein与线粒体裂解液孵育后回收检测
        5.2.5 α-Synuclein Y39E突变体的电转与分析
        5.2.6 稀溶液中α-Synuclein与Cu²⁺离子相互作用的检测
    5.3 结果与讨论
        5.3.1 α-Synuclein与完整线粒体相互作用的检测结果
        5.3.2 线粒体内α-Synuclein的谱图分析结果
        5.3.3 α-Synuclein与线粒体裂解液孵育后回收检测结果
        5.3.4 α-Synuclein Y39E突变体的电转与分析结果
        5.3.5 α-Synuclein与Cu²⁺离子相互作用的检测结果
    5.4 小结
第6章 总结与展望
参考文献
附录
致谢
作者简介及攻读学位期间发表的学术论文与研究成果



本文编号：3754897