蜡质裸脚菇胞外漆酶纯化、介体系统、纳米固定化及染料脱色研究
发布时间：2023-04-22 13:52
漆酶(Laccase EC 1.10.3.2)是一类隶属于铜蓝氧化酶家族的多酚氧化酶,通常以分子氧为受体催化底物进行单电子氧化,是一种高效的绿色催化剂。通过与一些小分子介体物质构成漆酶介体系统(LMS),可进一步拓宽漆酶作用范围。通过纳米固定化技术,可提高漆酶的稳定性和重复性,在环境污染物及木质素降解方面具有巨大的应用潜力。裸脚菇属(Gymnopus)真菌是小皮伞科的重要类群,在森林生态系统的碳素循环中扮演着重要的分解者作用,其种类繁多、系统发育关系复杂,已有研究主要围绕在系统分类方面,而木质纤维素降解酶鲜有报道。本研究以采集并分离自云南楚雄的裸脚菇子实体为材料,开展分离鉴定、菌丝最适培养条件、胞外木质素降解酶活性、Cu2+诱导产漆酶活性、胞外漆酶分离纯化、漆酶介体系统、纳米二氧化硅固定化漆酶制备,以及对染料脱色应用等研究,具体内容如下:1、采用形态学和转录间隔区(ITS)鉴定确定YAASM5159菌株为蜡质裸脚菇(Gymnopus luxurians)。采用单因子实验确定该菌株菌丝最适培养条件包括:碳源为淀粉,氮源为酵母浸粉、胰蛋白胨、牛肉膏,C/N比范围50-60/1,生长因子VB...
【文章页数】：122 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词
第一章 绪论
1.1 漆酶研究进展
1.1.1 漆酶的分类与功能
1.1.2 真菌漆酶的结构与反应机理
1.1.3 漆酶理化性质
1.1.4 漆酶分离纯化方法
1.1.5 漆酶基因克隆
1.2 漆酶应用研究
1.2.1 染料降解
1.2.2 生物漂白
1.2.3 生物脱毒
1.2.4 食品加工
1.3 漆酶介体系统
1.3.1 漆酶介体系统的氧化机制
1.3.2 介体类型
1.3.3 漆酶介体系统作用机理
1.4 漆酶固定化研究
1.4.1 固定化材料
1.4.2 固定化技术及分类
1.4.3 固定化漆酶应用
1.5 蜡质裸脚菇
1.6 本研究的目的与意义
1.7 技术路线图
第二章 云南野生裸脚菇的分离鉴定、培养条件与木质纤维素降解酶活性研究
2.1 实验材料
2.1.1 菌株分离与保存
2.1.2 培养基
2.1.3 实验试剂
2.1.4 实验仪器
2.2 实验方法
2.2.1 菌株分离与培养
2.2.2 形态与分子鉴定
2.2.3 菌丝体最适培养条件
2.2.4 液体发酵与样品制备
2.2.5 木质纤维素降解酶活性
2.2.6 Cu2+对液体发酵产漆酶量的影响
2.2.7 统计学分析
2.3 实验结果
2.3.1 形态与分子鉴定
2.3.2 菌丝体最适培养条件
2.3.3 木质纤维素降解酶活性
2.3.4 Cu2+对液体发酵产漆酶量的影响
2.4 分析与讨论
2.5 本章小结
第三章 YAASM5159菌株漆酶分离纯化及酶学特性
3.1 实验材料
3.1.1 菌株
3.1.2 培养基
3.1.3 试剂
3.1.4 实验仪器
3.2 实验方法
3.2.1 漆酶粗酶液的制备
3.2.2 漆酶分离纯化
3.2.3 SDS-PAGE
3.2.4 YAASM5159漆酶N-端测序
3.2.5 YAASM5159漆酶肽段测序
3.2.6 YAASM5159漆酶酶学性质
3.2.7 统计学分析
3.3 实验结果
3.3.1 漆酶分离纯化结果
3.3.2 漆酶肽段测序结果
3.3.3 N-端序列测序结果
3.3.4 YAASM5159漆酶酶学性质
3.4 分析与讨论
3.5 本章小结
第四章 漆酶介体系统对染料脱色应用研究
4.1 实验材料
4.1.1 漆酶
4.1.2 介体
4.1.3 染料
4.1.4 实验试剂
4.1.5 实验仪器
4.2 实验方法
4.2.1 漆酶介体系统(LMS)的构建
4.2.2 最适温度
4.2.3 最适pH
4.2.4 最适介体浓度
4.2.5 最适条件下漆酶介体系统对染料的降解效果
4.2.6 全波段扫描
4.2.7 统计学分析
4.3 实验结果
4.3.1 漆酶介体系统(LMS)的构建
4.3.2 最适温度
4.3.3 最适pH
4.3.4 最适介体浓度
4.3.5 最适条件下染料脱色效果
4.3.6 全波段扫描
4.4 分析与讨论
4.5 本章小结
第五章 纳米SiO2固定化漆酶的制备、表征及染料脱色研究
5.1 实验材料
5.1.1 漆酶
5.1.2 商品化纳米SiO2粒子
5.1.3 实验试剂
5.1.4 实验仪器
5.2 实验方法
5.2.1 SiO2载体的制备
5.2.2 漆酶固定化
5.2.3 SiO2载体及固定化酶的表征
5.2.4 漆酶酶活及固定化效率测定
5.2.5 SiO2-H-GLL最适固定化反应条件
5.2.6 SiO2-H-GLL酶学特性
5.2.7 固定化漆酶的染料脱色能力研究
5.2.8 统计学分析
5.3 实验结果
5.3.1 漆酶固定化及其表征
5.3.2 载体及固定化漆酶表征分析
5.3.3 最适固定化反应条件
5.3.4 酶学特性
5.3.5 固定化漆酶对染料的脱色能力研究
5.4 分析与讨论
5.5 本章小结
第六章 结论与进一步工作
6.1 全文结论
6.2 进一步工作
参考文献
致谢
附录1 基于内转录间隔区(ITS)的YAASM5159菌株序列
附录2 GLL漆酶N-末端测序谱图
个人简介
本文编号：3797763
【文章页数】：122 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词
第一章 绪论
1.1 漆酶研究进展
1.1.1 漆酶的分类与功能
1.1.2 真菌漆酶的结构与反应机理
1.1.3 漆酶理化性质
1.1.4 漆酶分离纯化方法
1.1.5 漆酶基因克隆
1.2 漆酶应用研究
1.2.1 染料降解
1.2.2 生物漂白
1.2.3 生物脱毒
1.2.4 食品加工
1.3 漆酶介体系统
1.3.1 漆酶介体系统的氧化机制
1.3.2 介体类型
1.3.3 漆酶介体系统作用机理
1.4 漆酶固定化研究
1.4.1 固定化材料
1.4.2 固定化技术及分类
1.4.3 固定化漆酶应用
1.5 蜡质裸脚菇
1.6 本研究的目的与意义
1.7 技术路线图
第二章 云南野生裸脚菇的分离鉴定、培养条件与木质纤维素降解酶活性研究
2.1 实验材料
2.1.1 菌株分离与保存
2.1.2 培养基
2.1.3 实验试剂
2.1.4 实验仪器
2.2 实验方法
2.2.1 菌株分离与培养
2.2.2 形态与分子鉴定
2.2.3 菌丝体最适培养条件
2.2.4 液体发酵与样品制备
2.2.5 木质纤维素降解酶活性
2.2.6 Cu2+对液体发酵产漆酶量的影响
2.2.7 统计学分析
2.3 实验结果
2.3.1 形态与分子鉴定
2.3.2 菌丝体最适培养条件
2.3.3 木质纤维素降解酶活性
2.3.4 Cu2+对液体发酵产漆酶量的影响
2.4 分析与讨论
2.5 本章小结
第三章 YAASM5159菌株漆酶分离纯化及酶学特性
3.1 实验材料
3.1.1 菌株
3.1.2 培养基
3.1.3 试剂
3.1.4 实验仪器
3.2 实验方法
3.2.1 漆酶粗酶液的制备
3.2.2 漆酶分离纯化
3.2.3 SDS-PAGE
3.2.4 YAASM5159漆酶N-端测序
3.2.5 YAASM5159漆酶肽段测序
3.2.6 YAASM5159漆酶酶学性质
3.2.7 统计学分析
3.3 实验结果
3.3.1 漆酶分离纯化结果
3.3.2 漆酶肽段测序结果
3.3.3 N-端序列测序结果
3.3.4 YAASM5159漆酶酶学性质
3.4 分析与讨论
3.5 本章小结
第四章 漆酶介体系统对染料脱色应用研究
4.1 实验材料
4.1.1 漆酶
4.1.2 介体
4.1.3 染料
4.1.4 实验试剂
4.1.5 实验仪器
4.2 实验方法
4.2.1 漆酶介体系统(LMS)的构建
4.2.2 最适温度
4.2.3 最适pH
4.2.4 最适介体浓度
4.2.5 最适条件下漆酶介体系统对染料的降解效果
4.2.6 全波段扫描
4.2.7 统计学分析
4.3 实验结果
4.3.1 漆酶介体系统(LMS)的构建
4.3.2 最适温度
4.3.3 最适pH
4.3.4 最适介体浓度
4.3.5 最适条件下染料脱色效果
4.3.6 全波段扫描
4.4 分析与讨论
4.5 本章小结
第五章 纳米SiO2固定化漆酶的制备、表征及染料脱色研究
5.1 实验材料
5.1.1 漆酶
5.1.2 商品化纳米SiO2粒子
5.1.3 实验试剂
5.1.4 实验仪器
5.2 实验方法
5.2.1 SiO2载体的制备
5.2.2 漆酶固定化
5.2.3 SiO2载体及固定化酶的表征
5.2.4 漆酶酶活及固定化效率测定
5.2.5 SiO2-H-GLL最适固定化反应条件
5.2.6 SiO2-H-GLL酶学特性
5.2.7 固定化漆酶的染料脱色能力研究
5.2.8 统计学分析
5.3 实验结果
5.3.1 漆酶固定化及其表征
5.3.2 载体及固定化漆酶表征分析
5.3.3 最适固定化反应条件
5.3.4 酶学特性
5.3.5 固定化漆酶对染料的脱色能力研究
5.4 分析与讨论
5.5 本章小结
第六章 结论与进一步工作
6.1 全文结论
6.2 进一步工作
参考文献
致谢
附录1 基于内转录间隔区(ITS)的YAASM5159菌株序列
附录2 GLL漆酶N-末端测序谱图
个人简介
本文编号：3797763
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