毛细管电泳在某些植物和动物细胞miRNA分析中的应用研究

发布时间：2023-04-27 01:01

　　毛细管电泳(Capillary electrophoresis,CE)又称高效毛细管电泳(High-performance capillary electrophoresis,HPCE),是目前应用非常广泛的一种分离分析技术。因具有高效、快速和样品消耗少等特点,非常适用于小分子RNA(microRNA,miRNA)这些易分解化合物的分离分析。MiRNA是一系列内源性的、非编码的短链小分子RNA,对生物体内基因的表达起着关键性的作用,许多癌症和疾病的发生都与特定miRNA的异常表达有着密切的关系。目前miRNA已逐渐成为重要的疾病诊断的生物标志物。miRNA的分析技术贯穿miRNA的研究和药物研发过程,并起到关键作用。因此,研究对miRNA的分离和高灵敏度检测技术在未来的临床诊断中有着非常重要的作用。本论文主要由以下几个部分组成:第一章,主要对CE的研究进展、分离模式、检测方法、进样方式和在线富集技术等进行了综述。此外,还对miRNA及其检测方法进行了介绍。第二章,采用高速毛细管电泳(HSCE)激光诱导荧光检测法(LIF),在动态凝胶电泳模式下对3个miRNA,miRNA-156、miR...

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【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
第一章 绪论
    1.1 毛细管电泳简介
        1.1.1 毛细管电泳的发展历史
        1.1.2 毛细管电泳的原理
        1.1.3 高速毛细管电泳
        1.1.4 毛细管的分离模式
            1.1.4.1 毛细管区带电泳
            1.1.4.2 毛细管凝胶电泳
            1.1.4.3 毛细管胶束电动色谱
            1.1.4.4 毛细管等电聚焦
            1.1.4.5 毛细管等速电泳
            1.1.4.6 毛细管电色谱
    1.2 毛细管电泳的检测方式
        1.2.1 激光诱导荧光检测法
        1.2.2 电化学检测法
            1.2.2.1 安培检测法
            1.2.2.2 电导检测法
            1.2.2.3 电位检测法
        1.2.3 化学发光检法
        1.2.4 紫外/可见吸收检测法
        1.2.5 质谱检测法
    1.3 毛细管电泳的进样方式
        1.3.1 常规毛细管电泳的进样方式
            1.3.1.1 电动进样
            1.3.1.2 扩散进样
            1.3.1.3 压力进样
            1.3.1.4 自发进样
        1.3.2 HSCE进样方式-缺口管进样
    1.4 毛细管电泳在线富集技术
        1.4.1 堆积
            1.4.1.1 场放大样品堆积
            1.4.1.2 大体积样品堆积
            1.4.1.3 场放大样品进样
        1.4.2 固相萃取
        1.4.3 瞬时等速电泳
    1.5 MicroRNA简介
    1.6 MicroRNA的检测技术
        1.6.1 Northern Blotting法
        1.6.2 微阵列芯片技术
        1.6.3 反转录-聚合酶链式反应
        1.6.4 滚环扩增技术
        1.6.5 均相LCR方法
        1.6.6 杂交链式反应
        1.6.7 CE在miRNA分析中的应用
    1.7 本论文研究内容简介
第二章 基于短毛细管高速电泳系统快速分离检测芭蕉叶中的miRNA
    2.1 引言
    2.2 实验部分
        2.2.1. 高速毛细管电泳系统
        2.2.2 试剂
        2.2.3 实验仪器
        2.2.4 溶液的配制
        2.2.5 样品溶液的制备
        2.2.6 实验步骤
        2.2.7 电泳条件
    2.3 结果与讨论
        2.3.1 无场放大进样
        2.3.2 进样方式的对比
        2.3.3 有无去光反馈对比
    2.4 动态凝胶电泳分离条件优化
        2.4.1 缓冲液体系的选择
        2.4.2 pH的优化
        2.4.3 筛分介质HEC浓度的选择
        2.4.4 筛分介质PVP浓度的选择
        2.4.5 分离电压的优化
        2.4.6 缓冲液浓度的优化
    2.5 工作曲线和检测限
    2.6 DNA探针的特异性
    2.7 香蕉叶中miRNA分析
        2.7.1 回收率的测定
    2.8 结论
第三章 基于核酸等温杂交链式反应与短毛细管高速电泳联用技术快速分离检测A549细胞中的miRNA
    3.1 引言
    3.2 实验部分
        3.2.1 试剂
        3.2.2 实验仪器
        3.2.3 溶液的配制
    3.3 实验步骤
    3.4 基于HCR与超滤管高灵敏度检测miRNA的实验原理
    3.5 miRNA引发HCR反应的验证
    3.6 采用超滤管去除H1、H2单体的可行性分析
    3.7 等温杂交链式反应产物峰合并的条件优化
        3.7.1 缓冲液类型的选择
        3.7.2 毛细管有效长度的优化
        3.7.3 缓冲液pH值的优化
        3.7.4 筛分介质HEC的优化
        3.7.5 分离电压的优化
    3.8 等温杂交链式反应条件的优化
        3.8.1 等温杂交链式反应时间的优化
        3.8.2 等温杂交链式反应体系pH的优化
    3.9 工作曲线和检测限
    3.10 DNA探针的特异性
    3.11 A549细胞中的miRNA分析
        3.11.1 回收率的测定
    3.12 结论
第四章 集成铜微储液池的毛细管高速电泳快速分离检测木瓜叶中的miRNA
    4.1 引言
    4.2 实验部分
        4.2.1 试剂
        4.2.2 实验仪器
        4.2.3 溶液配制
        4.2.4 实验装置
            4.2.4.1 激光诱导荧光检测系统
            4.2.4.2 短毛细管高速电泳分离系统
        4.2.5 实验步骤
    4.3 装置重现性的考察
    4.4 结果与讨论
        4.4.1 miRNA-156与C2分离条件的优化
            4.4.1.1 运行缓冲液pH值的优化
            4.4.1.2 筛分介质PVP含量的优化
            4.4.1.3 筛分介质HEC含量的优化
            4.4.1.4 分离电压的优化
        4.4.2 工作曲线和检测限
        4.4.3 木瓜叶中miRNA的测定
        4.4.4 回收率的测定
    4.5 结论
参考文献
致谢
个人简历



本文编号：3802545