毛果杨苯丙氨酸解氨酶活性比较及肉桂酸制备

发布时间：2023-05-18 23:26

　　【目的】苯丙氨酸解氨酶(PAL)在苯丙烷代谢途径中具有重要作用,Ptr PAL基因的挖掘、酶学性质分析和应用为毛果杨苯丙烷代谢途径的研究和肉桂酸(t-ca)合成提供参考。【方法】基于基因组注释信息,挖掘毛果杨Ptr PAL基因,进行原核表达和酶学性质分析。以L-苯丙氨酸(L-Phe)为底物,通过全细胞催化合成t-ca。【结果】通过挖掘毛果杨基因组得到了5个Ptr PAL基因,系统发育树分析表明其在进化上分为两组。Ptr PAL3和PtrPAL4来自不同进化分支,选取其进行原核表达和酶学性质分析。镍柱纯化后的重组蛋白re PtrPAL3和re PtrPAL4最适温度分别是55℃和60℃,最适p H分别是8.5和8.0,比酶活分别为3.363和3. 381 U/mg,且均具有微弱的酪氨酸解氨酶活力。重组蛋白的动力学分析表明,re PtrPAL3对L-Phe的亲和力更高。将re PtrPAL3应用于L-Phe脱氨生产t-ca,全细胞催化7 h可产生104 mmol/L t-ca。【结论】具有不同转录特异性的两种re PtrPAL酶学性质接近,但re PtrPAL3表现出更高的催化效率,更适合...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料与试剂
    1.2 试验方法
        1.2.1 毛果杨PAL基因搜索与序列分析
        1.2.2 重组rePtrPALs的原核克隆表达与纯化
        1.2.3 重组rePtrPAL的酶学性质测定
        1.2.4 全细胞催化反应
        1.2.5 HPLC检测反应底物和产物
2 结果与分析
    2.1 毛果杨PAL基因特征
    2.2 重组rePtrPAL的表达纯化与活力
    2.3 rePtrPAL3和rePtrPAL4酶学性质
        2.3.1 温度和p H对酶活的影响
        2.3.2 rePtrPALs的热稳定性
        2.3.3 rePtrPALs动力学参数
    2.4 重组大肠杆菌生物催化合成反式肉桂酸
3 讨论



本文编号：3819206