毛细管电泳在生物样品分离分析中的应用研究
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【摘要】:毛细管电泳(CE)作为一种较新的微分离技术,具有快速简便、分离效率高、试剂消耗量少和灵敏度高等特点,广泛用于医学、环境和食品等复杂样品的分离分析。激光诱导荧光检测(LIF)是毛细管电泳最灵敏的检测方法之一,非常适合于复杂样品中的痕量组分分析。目前,CE-LIF常用于本身具有荧光性能或易被荧光试剂标记和染色的物质测定,但传统的荧光探针种类少,标记时间长。量子点作为一种新型的荧光探针,具有独特的光化学特性,如宽的激发光谱、窄的发射谱带、不易漂白和极好的光稳定性等,在生命分析化学、生物化学、分子生物学等领域显示出广阔的应用前景。生物样品具有样品量少、待测组分含量低、基质复杂等特点,实现生物样品中痕量组分的快速、灵敏检测,是分析工作者面临的巨大挑战。因此,开展生物样品中痕量组分分析方面的应用研究,建立复杂基质中目标分子的灵敏检测方法,具有重要的意义。 该论文在综述前人工作的基础上,主要开展了以下研究工作: (1)建立了一种同时分离测定鱼血液中皮质醇、雌二醇及睾酮含量的胶束电动色谱法。研究了缓冲溶液浓度、添加剂含量、pH、分离电压及温度对分离的影响,得到了最佳分离条件。即运行缓冲溶液为12mmol/L硼砂+60mmol/L SDS+6mmol/L β-CD+8%(v/v)乙腈,pH9.5,检测波长225nm,分离电压25kV,分离温度25℃的条件下,采用毛细管短端进样(毛细管有效长度10cm),反向分离的模式,三种类固醇激素在4min内达到基线分离。且分析物在1.0~100.0μg/mL范围内呈良好的线性关系(相关系数0.9932)。该法用于鱼血液中类固醇激素的检测,回收率为84.60~113.30%,满足生物样品检测要求。 (2)以谷胱甘肽(GSH)为稳定剂合成了水溶性CdTe QDs,建立了一种量子点-溶菌酶共轭物分离分析的毛细管电泳新方法。以EDC(碳二亚胺盐酸盐)和NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)为连接剂,将QDs与溶菌酶进行生物偶联,探讨了偶联剂用量、缓冲溶液类型及pH对偶联效果的影响,得到了最佳偶联条件:50mmol/L KH2PO4-Na2HPO4, pH7.4,20μL2.8×10-3mol/L CdTe,30μL25mg/mL EDC,30μL1.5mg/mL NHS,40μL1mg/mL溶菌酶。在最佳毛细管电泳分离条件(即10mmol/L硼砂,pH9.25,分离电压20kV,温度25℃)下,GSH-CdTe QDs及其溶菌酶共轭物能有效分离。该法可用于生物样品中痕量溶菌酶的标记检测。 (3)利用合成QDs的优异荧光性能,以GSH-CdTe QDs作为荧光探针,建立了快速、灵敏测定人血清中二羟丙茶碱(DPP)含量的荧光分析法。考察了GSH-CdTe QDs在不同类型缓冲溶液及不同温度下的荧光强度,探讨了缓冲溶液pH,反应时间,加入次序,干扰离子等因素对GSH-CdTe QDs-DPP体系荧光强度的影响,得到最佳实验条件,即50mmol/L KH2PO4-Na2HPO4缓冲溶液,pH8.4,2℃下反应8分钟。在最佳实验条件下,固定QDs浓度为2.8×10-6mol/L, DPP在1.67×10-6~1.33×10-5mol/L范围内时,F0/F与DPP浓度呈良好线性关系(相关系数为0.9970),检出限2.24×10-7mol/L,相对标准偏差为3.05%(n=3)。将该法成功用于人血清中DPP的测定,回收率为87.41~117.94%,结果满意。此外,初步探讨了DPP的加入引起GSH-CdTe QDs荧光猝灭的反应机理。
【关键词】:毛细管电泳 类固醇激素 量子点 荧光探针
【学位授予单位】:浙江师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2013
【分类号】:O658.9
【目录】:
- 摘要4-6
- ABSTRACT6-12
- 1 绪论12-30
- 1.1 毛细管电泳概述12-19
- 1.1.1 毛细管电泳的基本装置12-13
- 1.1.2 毛细管电泳的特点13-14
- 1.1.3 CE基本分离模式和原理14-17
- 1.1.3.1 毛细管区带电泳(CZE)14-15
- 1.1.3.2 胶束电动毛细管色谱(MECC)15-16
- 1.1.3.3 毛细管凝胶电泳(CGE)16
- 1.1.3.4 毛细管等电聚焦(CIEF)16-17
- 1.1.3.5 毛细管等速电泳(CITP)17
- 1.1.4 毛细管电泳检测器17-19
- 1.1.4.1 紫外-可见吸收检测18
- 1.1.4.2 激光诱导荧光检测18
- 1.1.4.3 电化学检测18-19
- 1.1.4.4 质谱检测19
- 1.1.4.5 化学发光检测器19
- 1.2 毛细管电泳的应用19-21
- 1.2.1 毛细管电泳在量子点分析中的应用19-20
- 1.2.2 毛细管电泳在生物样品分析中的应用20-21
- 1.2.3 毛细管电泳在农药分析中的应用21
- 1.3 量子点概述21-24
- 1.3.1 量子点的特点22-23
- 1.3.2 量子点的表征23-24
- 1.3.2.1 透射电子显微镜法23
- 1.3.2.2 红外吸收光谱法23
- 1.3.2.3 紫外可见吸收光谱法23-24
- 1.3.2.4 荧光光谱法24
- 1.4 量子点的应用24-29
- 1.4.1 无机离子检测24-25
- 1.4.2 药物检测25-26
- 1.4.3 蛋白质、核酸等生物大分子的标记26-27
- 1.4.4 生物组织和细胞的标记27-28
- 1.4.5 用于活体成像28-29
- 1.5 课题的提出29-30
- 2 胶束电动色谱法快速测定鱼血液中的类固醇激素30-40
- 2.1 引言30-31
- 2.2 实验部分31-32
- 2.2.1 仪器和试剂31-32
- 2.2.2 样品制备32
- 2.3 结果与讨论32-39
- 2.3.1 缓冲溶液浓度的选择32-33
- 2.3.2 添加剂的选择33-35
- 2.3.2.1 β-CD对分离的影响33
- 2.3.2.2 表面活性剂(SDS)浓度对分离的影响33-34
- 2.3.2.3 乙腈(ACN)含量对分离的影响34-35
- 2.3.3 缓冲溶液pH对分离的影响35-36
- 2.3.4 分离电压和温度的影响36
- 2.3.5 标准曲线的建立36-37
- 2.3.6 样品测定37-39
- 2.4 结论39-40
- 3 GSH-CdTe量子点与溶菌酶的偶联及其毛细管电泳分离分析研究40-52
- 3.1 引言40-41
- 3.2 实验部分41-42
- 3.2.1 仪器和试剂41
- 3.2.2 GSH-CdTe量子点的制备和提纯41-42
- 3.2.3 量子点溶菌酶共轭物的制备42
- 3.2.4 毛细管电泳仪操作42
- 3.3 结果与讨论42-51
- 3.3.1 量子点表征42-45
- 3.3.1.1 量子点的紫外荧光图谱42-44
- 3.3.1.2 量子点的红外吸收图谱44
- 3.3.1.3 量子点的透射电子显微镜图谱44-45
- 3.3.2 量子点标记条件的选择45-48
- 3.3.2.1 EDC溶液浓度45-46
- 3.3.2.2 NHS溶液浓度46-47
- 3.3.2.3 缓冲溶液类型47
- 3.3.2.4 缓冲溶液pH47-48
- 3.3.3 分离条件的选择48-51
- 3.3.3.1 缓冲溶液类型48-49
- 3.3.3.2 缓冲溶液浓度49
- 3.3.3.3 缓冲溶液pH49-50
- 3.3.3.4 分离电压和分离温度50-51
- 3.4 结论51-52
- 4 CdTe量子点荧光猝灭法测定人血清中的二羟丙茶碱52-62
- 4.1 引言52-53
- 4.2 实验部分53-54
- 4.2.1 仪器与试剂53
- 4.2.2 GSH-CdTe量子点的制备和提纯53
- 4.2.3 二羟丙茶碱含量的测定53-54
- 4.2.4 样品制备54
- 4.3 结果与讨论54-61
- 4.3.1 二羟丙茶碱检测条件的优化54-57
- 4.3.1.1 缓冲溶液的影响54-55
- 4.3.1.2 温度的影响55
- 4.3.1.3 pH值的影响55-56
- 4.3.1.4 反应时间的影响56-57
- 4.3.1.5 试剂加入顺序的影响57
- 4.3.2 标准曲线、检出限和精密度57-58
- 4.3.3 干扰物质对反应体系的影响58
- 4.3.4 机理初探58-60
- 4.3.5 分析应用60-61
- 4.4 结论61-62
- 5 结论与展望62-64
- 5.1 结论62-63
- 5.2 展望63-64
- 参考文献64-75
- 致谢75-76
- 攻读硕士学位期间取得的研究成果76-77
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 邱月琴;蔡继业;;量子点在细胞以及体内生物中成像的研究进展[J];材料导报;2012年01期
2 余丽双;褚克丹;;毛细管电泳在中药研究中的应用概述[J];福建分析测试;2011年06期
3 张虹,金玉,陈立仁;高效液相色谱法测定血清中茶碱浓度[J];分析测试技术与仪器;2000年02期
4 汪振辉;周漱萍;;二羟丙茶碱的极谱测定法研究[J];分析化学;1989年10期
5 张爱梅;闫炜;王怀生;;CdTe/CdS量子点-蛋白质与头孢曲松钠的相互作用[J];分析化学;2008年04期
6 胡华军;付涛;张明洲;洪治;陈宗伦;刘军;;CdTe/ZnSe核壳量子点免疫层析试纸条检测克伦特罗的研究[J];分析化学;2010年12期
7 刘晓红;罗金平;田青;刘春秀;蔡新霞;;荧光量子点免疫标记法检测炭疽芽孢杆菌[J];分析化学;2011年02期
8 赵斌;赵肃清;周丽华;张q;张俊;;水溶性量子点标记狂犬病P蛋白单克隆抗体的研究[J];分析化学;2012年06期
9 罗教华,舒为群,章竹君,陈丁龙;家兔血液中西咪替丁的微透析-毛细管电泳测定研究[J];分析科学学报;2005年03期
10 陈启凡;王文星;葛颖新;徐淑坤;杨冬芝;;水热法合成CdTe量子点及其与蛋白质连接作为生物荧光探针的研究[J];分析试验室;2007年03期
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